脳梗塞に対する脂肪細胞由来幹細胞移植投与方法の確立と健側の役割の解明

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K18432
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 定方 英作 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 研究協力員 (10772139)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 再生医療 / 脂肪幹細胞 / 脳梗塞

Outline of Annual Research Achievements

230～280gのSparague-Dawley種のラットを使用し、総頚動脈より4-0ものフィラメント糸を挿入し中大脳動脈閉塞モデルを作成した。80分経過後にフィラメントを除去し再開通させ、24時間後にヒト脂肪細胞由来幹細胞(ADSCs)の投与を行った。ポリエチレンカテーテルを用いて細胞数を100万個、1000個に振り分けて梗塞と同側の頸動脈から緩徐に投与を行った。
投与モデル間におけるFunctional recovery 、梗塞サイズの検討した。まず投与後から投与28日後までmNSSをとり、神経機能の改善を投与細胞群間で比較検討を行った。細胞投与群ではコントロール群と比較して神経機能の改善がみられ、投与細胞群間でも高量の細胞を投与した群の方が神経機能改善がみられた。
脳梗塞巣のサイズの評価ではventricle sizeやcortical atrophyの定量を行った。細胞投与28日後に4%PFAの還流固定を行い脳組織を摘出し、cryostatを用いて30μmm sliceを作成した。等間隔に5切片をセレクトし、20％ cresyl iolet溶液を用いて染色を行った。ventricle sizeやcortical atrophyの定量をImage Jを用いて評価した。細胞投与群ではコントロール群と比較してcortical atrophyは小さく、脳梗塞巣の縮小が認められた。また細胞投与群間でも高量の細胞を投与した群の方が脳梗塞巣の縮小が認められた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

中大脳動脈閉塞モデルのラット作成の手技が安定しなかったため、細胞投与まで時期を擁してしまい予定より遅れて細胞投与を開始してしまった。そのため脳梗塞巣のサイズ評価までは行えたが、免疫染色による詳細な評価がまだ行えていない。

Strategy for Future Research Activity

免疫染色が行えていないため、今後は神経細胞の再生や抗炎症作用などの着目した免疫染色を行い論文作成を行う予定である。

Causes of Carryover

免疫染色が十分行えなかったため次年度使用が生じてしまった。使用計画としては免疫染色時に使用するPBSの購入などに充てる予定。