2019 Fiscal Year Research-status Report
低悪性度てんかん原性腫瘍周囲の正常神経細胞におけるてんかん発症機構の解明
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19K18448
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| Research Institution | National Center of Neurology and Psychiatry |
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Principal Investigator |
飯島 圭哉 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター, 病院, 医員 (10751878)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | GABA / グルタミン酸 / 神経伝達物質 / LEAT / てんかん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
液体クロマトグラフィ法にて、ヒト脳組織検体からのグルタミン酸・GABA・Glycineの濃度を測定するための条件検討を行った。この結果、下記の測定条件が最適であると考えられた。HPLCシステム：MODEL 5600A(esa) ポンプ：M582 オートサンプラー ：M542 カラム恒温槽：505 検出器：CoulArray(4Channel) ソフトウェア：CoulArray soft Ver.3.06
前処理装置：密閉式超音波破砕装置：BIORUPTOR® UCD-250HSA
測定条件0.1Mリン酸Na/メタノール=80/20、pH=6.85、流速 1.0mL/min、注入量：5μL、カラム温度：50℃、Sample 20μLにOPA/NAC試薬20μL添加し、反応時間1.5分後に1M酢酸10μL添加した反応液5μLをHPLCに導入。試薬類調製
移動相：超純水800mLにリン酸一ナトリウム二水和物7.1gを溶解し0.45メンブルンフィルターろ過。ろ過した溶液にメタノール200ｍＬを加え水酸化ナトリウムでpH6.85に調整。過塩素酸（70％）0.5mLを超純水で100mLにメスアップ。0.3N過塩素酸溶液を超純水で10倍希釈。酢酸（ＭＳ用）5.8mLを超純水で100mLにメスアップ。20mgOPAを1mLメタノールに溶解。このOPA試薬に10mgNACと9.0mLの50mM四ホウ酸ナトリウムを加え溶解。標準液：10mgアミノ酸を10mLの0.03N過塩素酸溶液で溶解。1mg/mLアミノ酸を100μLずつ入れ混和。1mg/mLアミノ酸標準液から100μg/mLおよび25μg/mLの標準液を調整し、2点検量法で定量。12症例の低悪性度てんかん原性腫瘍について、GABA、Glycin、グルタミン酸の濃度を定量した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
予定していたてんかん原性腫瘍の神経伝達物質の濃度を、液体クロマトグラフィ法にて解析することに成功しており、おおむね順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
てんかん原性腫瘍の神経伝達物質の濃度を、液体クロマトグラフィ法にて解析することに成功しており、今後は症例数を追加し、データを解析していく。
また、病理組織学的解析と遺伝子解析を並行して行い、これらとの相関を解析していく。
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| Causes of Carryover |
当初の見込みよりも実験試薬の使用量が少なかったため、次年度使用額が発生した。次年度の実験の予定数を増やすことで、追加実験に使用する予定である。
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