2020 Fiscal Year Research-status Report
悪性骨軟部腫瘍に対する分子標的治療の個別化とバイオマーカーの探索
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19K18481
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| Research Institution | Osaka International Cancer Institute |
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Principal Investigator |
伊村 慶紀 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪国際がんセンター(研究所), その他部局等, 整形外科医長 (40772687)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 骨肉腫 / 淡明細胞肉腫 / CIC-DUX4肉腫 / 類上皮肉腫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウス骨肉腫高肺転移細胞株LM8においてPhospho-RTK arrayによりPDGFRαの著明な活性化が認められた。Multiple Tyrosine Kinase InhibitorであるTAS-115は濃度依存的にPDGFRαとその下流のAktのリン酸化を阻害し、LM8の細胞増殖を抑制した。In vivoにおいてもTAS-115投与群で原発巣と肺転移巣の腫瘤増大抑制効果が認められた。原発巣と肺転移巣のlysateを用いたPhospho-RTK arrayではPDGFRαのみならずAXLやFLT-3の活性化が認められ、それらはTAS-115投与群で抑制されていた。TAS-115はLM8に対してPDGFRα, AXL, FLT-3シグナルの不活化を介して抗腫瘍効果を発揮している可能性が示唆され、今後TAS-115は骨肉腫の有効な新規治療薬となり得る。ヒト淡明細胞肉腫細胞株であるHewga-CCS, MP-CCS-SY, KAS, SU-CCS1の計4株ではMETが発現しており、そのうちHewga-CCS, MP-CCS-SYにおいてはMETのリガンドであるHGFの発現およびMETの活性化が認められた。他の2株ではHGFは検出されず、METの活性化は微弱であった。HGFを発現している2株においてMET阻害剤投与により細胞増殖抑制効果およびG0/G1期でのcell cycle arrestが観察された。In vivoにおいてもin vitroの結果と同様にHGFを発現しているHewga-CCSではMET阻害剤投与による腫瘤増大抑制効果を認めたが、発現していないKASでは明らかな抑制効果を認めなかった。淡明細胞肉腫においてHGFのautocrine的な作用がMETシグナルの活性化に寄与している可能性があり、HGFの発現がMET阻害剤の感受性に相関しているものと考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
現在まで骨肉腫と淡明細胞肉腫に関して、肉腫細胞株を用いて活性化している受容体をPhospho-RTK arrayにより網羅的に調べた。そして、Aktなどの下流シグナルの活性化に寄与しているか否かを確認し、それらを標的とした分子標的治療による抗腫瘍効果をin vitro, in vivo双方において検討してきた。また、以前に我々は滑膜肉腫細胞株ではMETやPDGFRα、類上皮肉腫細胞株ではMET、CIC-DUX4肉腫細胞株ではIGF-1Rが活性化し、それらに対する阻害剤が奏功することを報告しているが、受容体の活性化のメカニズムや分子標的治療の効果を予知するバイオマーカーの解析はまだ不十分である。
肉腫には疾患特異的な染色体転座とそれに伴う融合遺伝子が存在するものが多く、融合遺伝子は腫瘍の発生や増殖に関わっているとされている。現在、各々の骨軟部肉腫においてそれらの融合遺伝子をsiRNAで抑制できるかを検証している。また、類上皮肉腫ではSMARCB1/INI1遺伝子の欠失が特徴的とされ、現在ヒト類上皮肉腫細胞株にSMARCB1/INI1遺伝子を強制発現させ、安定発現細胞株の作製を試みている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、淡明細胞肉腫、CIC-DUX4肉腫、類上皮肉腫において疾患特異的な遺伝子異常と受容体、そのリガンド、リン酸化受容体の発現との関連性を検討していく。その他の様々な組織型の骨軟部肉腫においても細胞株における活性化受容体やその下流シグナルを同定し、in vitro, in vivoにおいてその受容体を標的とした分子標的治療による抗腫瘍効果を評価していく予定である。そして、ウエスタンブロット法や免疫組織化学染色法による各々の受容体、そのリガンド、リン酸化受容体のタンパク発現解析、ELISA法による血中リガンド量測定が分子標的治療の効果を予知するバイオマーカーとなり得るかを検討する。さらに、我々が実際に手術等で採取した骨軟部肉腫症例の腫瘍組織においても細胞株と同様の受容体、リガンド、リン酸化受容体が発現しているかを検討し、予後との相関などを調査していく予定である。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額が生じた理由としては、肉腫の受容体活性化のメカニズムや分子標的治療薬の抗腫瘍効果を予知するバイオマーカーの解析において遅れが生じており、それらにかかる必要物品の購入が計画より遅れていることが挙げられる。必要物品としては、具体的には免疫組織化学染色法やウエスタンブロット法に使用する抗体、受容体やそのリガンド、融合遺伝子の発現を抑制するsiRNA、遺伝子導入試薬などである。また、今年度の使用計画としては、遅れが生じている受容体活性化のメカニズムの解析やバイオマーカー探索を進めるために必要な物品費等に使用する予定である。
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