development of new assay for detecting circulating prostate cancer cell using new measuring system for circulating tumor cells

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K18563
• Research Institution: Kagawa University
• Principal Investigator: 加藤 琢磨 香川大学, 医学部, 助教 (70625673)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 前立腺癌 / 循環腫瘍細胞

Outline of Annual Research Achievements

酸素プラズマの表面処理にてプラスチック基板上の親水性を適度にコントロールした。
前立腺癌細胞株（ＰＣ－３）を疑似血液に混濁して基板へ細胞を付着させ、基板全面で単層配列（１３００～１７００万個／基板）を作成した。免疫染色の後、顕微鏡にて観察を行った。至適条件の検討では、①室温にて検体の処理は可能、②基盤付着後２日以内であれば観察可能であることが確認された。③サイトケラチン、ＤＡＰＩ、ＣＤ４５の染色は下記の濃度設定が指摘あることが分かった。ＰＢＳ　３０００μｌ，ＤＡＰＩ　６０μｌ、ＣＫ－ＰＥ　６０μｌ、ＥｐＣＡＭ－Ａｌｅｘａ４８８　６０μｌ、ＣＤ４５－Ａｌｅｘａ６４７　１００μｌ（ｔｏｔａｌ　３２８０μｌ）上記実験系にてＰＣ－３添加疑似血液による循環腫瘍細胞の観察ができることを確認した。この結果は、「単離細胞標本、単離細胞標本の製造方法、及び目的細胞の検出方法」として特許の出願を行った（ＰＣＴ／ＪＰ２０１９／０２７６９０）サイトケラチン、ＤＡＰＩ、ＣＤ４５を用いてＰＣ－３添加疑似血液による循環腫瘍細胞の観察が確認することができており、この結果を現在論文にまとめている。ＣＫ、ＥｐｉＣＡＭ、ＣＤ４５の発現について独自開発のソフトウェアにて解析が可能か現在検討中である。実験系の再考を行い明視野にて細胞を確認する系、自動ｃｏｕｎｔ法の開発などが課題となっている。また、single cell pickingの技術開発も並行して進めており、CTCのlive cellの抽出が可能となるか検討中である。今後は臨床研究も並行して行い、前立腺がん患者の血液サンプルを採取し本実験系の実臨床への実装が可能か検証を行っていく予定である。