2019 Fiscal Year Research-status Report
子宮平滑筋細胞における細胞容積調節塩素チャネルの妊娠による影響に関する研究
Project/Area Number |
19K18669
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Research Institution | Shiga University of Medical Science |
Principal Investigator |
山田 一貴 滋賀医科大学, 医学部, 非常勤講師 (30770234)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | VRAC / LRRC8A / 妊娠 / 陣痛 / 子宮 / 平滑筋細胞 / マウス |
Outline of Annual Research Achievements |
全細胞型パッチクランプ法を用いて, 妊娠に伴うマウス子宮平滑筋細胞の膜容量 (細胞膜面積に比例) の変化, および Swelling-induced Cl- current の変化を検討した. 細胞灌流液を等張液から低張液に替えると, 細胞の膨張とともに同電流の増大が観察され, 低張液から選択的阻害剤を溶解した低張液に替えると, 細胞の膨張は大きく変化せずに増大した同電流は大きく抑制された. 低張液で増大した電流は, 実験条件 (電極内液, 細胞灌流液) における Cl- の平衡電位付近で逆転し, かつ同電流の阻害剤で抑制されたことで, 同電流であると同定した. 非妊娠期, 妊娠7日目, 13日目, 18日目で同電流を記録し, 電流密度を比較したところ, 非妊娠期と比較してそれぞれ約 50~60 % 減少し, 妊娠 18日目では有意差を認めた. 細胞容積の調節を担う Volume-Regulated Anion Channel (同電流はこのチャネルを介する) の分子基盤である Leucine - rich repeat-containing 8A (以下, LRRC8A) の発現を検討した. ウェスタンブロッティング法において, 妊娠・非妊娠子宮ともに LRRC8A タンパク質の発現が確認されたが, 妊娠による有意な変化は認めなかった. 免疫細胞化学法において, 妊娠・非妊娠子宮ともに細胞膜を含めた細胞全体にびまん性に同タンパク質の発現が確認され, 妊娠による有意な変化は認めなかった. 同電流は, Cl-の細胞内濃度によって細胞の電気的活動に対して興奮性にも抑制性にも働きうることから, 同電流が抑制性に働くと仮定すると妊娠期における同電流の減少によって, 子宮平滑筋細胞の興奮性は上昇し, 陣痛発来の電気生理学的素地が形成されている可能性が示唆された.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
検体数は多くはないものの, 当初の予定通り, 全細胞型パッチクランプ法を用いた Swelling-induced Cl- current の検討が達成されており, Immunoblotting 法による LRRC8A タンパク質の存在が確認され, 共焦点レーザー顕微鏡を用いて LRRC8A タンパク質の細胞内局在を免疫蛍光組織学的に確認された. また, それぞれにおいて非妊娠期と妊娠期で比較・検討できている.
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Strategy for Future Research Activity |
今後は, 検体数を増やすとともに, 研究報告に重点を置く. Swelling-induced Cl- current の電流密度が非妊娠期に比して妊娠期が減少した要因について考察・検討し, 陣痛発来の電気生理学的素地が形成されている可能性について検討する.
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Research Products
(1 results)