2021 Fiscal Year Research-status Report
間葉系幹細胞からの前顆粒膜細胞の誘導 -体外培養系での卵子獲得を目指して-
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19K18692
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Research Institution | University of Fukui |
Principal Investigator |
宮崎 有美子 福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 特命助教 (10808710)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 間葉系幹細胞 / Wilms Tumor 1 / Steroidogenic factor 1 |
Outline of Annual Research Achievements |
中胚葉から副腎や性腺への分化過程において、Steroidogenic Factor-1(以下SF-1)やWilms Tumor 1(以下WT1)やといった転写因子が重要な役割を担うと推測されている。このうち、中胚葉から副腎や精巣への分化メカニズムは、多くの研究知見が集積されつつある。一方で、中胚葉から卵巣とくに顆粒膜細胞が分化発生するメカニズムは、未だ明らかでない。SF-1はステロイドホルモン産生のマスター転写因子であり、我々はこれまでに、中胚葉由来の間葉系幹細胞にSF-1遺伝子を導入し、cAMP刺激を加えることで、雌雄の性ステロイド産生細胞(黄体細胞とLeydig細胞)や、副腎皮質のコルチゾール産生細胞を作成した。さらに、同様の手法を用いて、ヒト臍帯血由来の間葉系幹細胞が、高率に黄体化顆粒膜細胞へ分化することも証明した。 今回我々は、ヒト羊膜由来間葉系幹細胞(hAMMSC)にレンチウイルスを用いてWT1遺伝子、SF-1遺伝子を導入しステロイド合成酵素の発現をリアルタイムPCRにて解析した。WT1、SF1遺伝子導入により、hAMMSC は複数のステロイド合成酵素遺伝子を発現した。P450scc, P450c17 mRNAは、SF1, WT-1のいずれにおいても発現が上昇した。P450aro mRNA, P450c21 mRNAはWT1においてのみ、3β-HSD mRNAはSF-1においてのみ、その発現が上昇した。更に、ルシフェラーゼレポーターアッセイにて、WT1はP450aroのプロモータ活性を直接的に制御する可能性が示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
hAMMSC分離、レンチウイルスを用いた遺伝子導入により、ステロイドホルモン合成酵素遺伝子、蛋白の発現解析を安定的に実施できている。
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Strategy for Future Research Activity |
WT1遺伝子、SF-1遺伝子をhAMMSCsに導入し、培養上清を用いてテストステロン、プロジェステロンなどのステロイド合成をELISAにて検討する。更に、WT1とSF-1を同時にhAMMSCsに導入した場合におけるステロイド合成酵素遺伝子発現について解析する。
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Causes of Carryover |
コロナ禍により学会がWEB開催となり旅費を削減でき次年度使用が生じた。次年度使用額を用いて多サンプルの解析、ELISAによる蛋白発現解析を行う。
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