2019 Fiscal Year Research-status Report

EBウイルス関連microRNAによる上咽頭癌治療後の予後推定法の開発

Research Project

Project/Area Number	19K18725
Research Institution	Kanazawa University
Principal Investigator	青木由宇金沢大学, 附属病院, 医員 (00837172)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2021-03-31
Keywords	BART miRNA / EBV / 上咽頭癌
Outline of Annual Research Achievements	上咽頭癌はほとんどの症例でEpstein-Barr Virus (EBV) が発癌に関与しており、EBウイルス関連上咽頭癌細胞から産生されるmiRNAであるBamHI A rightward transcript miRNA (BART miRNA) は44種類確認されている。これまで最も鋭敏な血中バイオマーカーとされてきたEBV-DNAコピー数は腫瘍体積と相関し、腫瘍が微小な場合はEBV-DNAコピー数定量法の感度が下がるという欠点がある。また、保険収載されているEBV抗体価測定法では、癌完治後も陽性が持続することが少なくないため、特異度が低い。そこで、必ずしも腫瘍体積と相関せず癌細胞から活動的に産生されるmiRNAを見出すことに着目した。EBVがコードする44種類のBART miRNAから腫瘍体積によらず多量に患者血中に存在するものを見出せれば、上咽頭癌患者の微小な腫瘍の残存・再発病変を早期に捉えることが可能となり、補助化学療法の適用や早期の再発の診断が可能になる点が臨床的に意義深い。また、アポトーシスや壊死を来した癌細胞由来とされるEBV-DNAに対し、BART miRNAは生きた癌細胞から活動的に産生されるため、生きた癌細胞の生物学的な活動状態を反映しており、BART miRNAの機能を解析することで癌の活動状態を解明していく。 2019年度は上咽頭癌細胞株２種類を用いて44種類のBART-miRNAを網羅的に解析した。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason EBV陽性上咽頭癌細胞株とEBV陰性上咽頭癌細胞株を用いてそれぞれ44種類のBART miRNAの定量を行った。また、EBV陽性上咽頭癌細胞株とEBV陰性上咽頭癌細胞株のそれぞれを、シスプラチンを用いて抗癌剤耐性株を樹立し、それぞれ44種類のBART miRNAの定量を行った。
Strategy for Future Research Activity	培養上清についてPotassium Bromine (KBr) Gradientを用いた超遠心法により各BART miRNAがエクソソーム分画かリポ蛋白分画にあるかを同定することで分泌様式を確認する。 BART miRNAについて、上咽頭癌治療前後の患者血中コピー数を定量する。検体数は上咽頭癌患者50名ほどで、コントロール群として健常者20人ほどと比較する。
Causes of Carryover	解析機器や試薬の費用が申請時点よりかかることが予想されたため。