上咽頭癌腫瘍微小環境におけるエクソソームを介した免疫寛容機構の解明

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K18800
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 阿河 光治 金沢大学, 医学系, 協力研究員 (90756230)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 上咽頭癌 / 腫瘍関連マクロファージ

Outline of Annual Research Achievements

Epstein-Barrウイルス（EBV）関連上咽頭癌組織は病理学的にリンパ上皮腫といわれるほど著しい細胞障害性T細胞（CTL）が浸潤している．これら機能していないCTLに対して免疫チェックポイント阻害剤が著効すると予想されたが，その効果は予想を下回るものであることが判明した．そこで，galectinはM2型の腫瘍関連マクロファージを誘導すること，上咽頭癌細胞はEBV癌蛋白LMP1発現エクソソームを分泌すること，そして，LMP1はgalectinを誘導することから，この免疫抑制機構にはM2と呼ばれる腫瘍関連マクロファージの誘導機構活性化が関与することが推察される．本研究では，仮説「上咽頭癌腫瘍微小環境においてEBV癌蛋白LMP1発現エクソソームが腫瘍関連マクロファージを介して免疫寛容を誘導する」を検証する．
すなわち，1. LMP1発現エクソソームの細胞内からの放出機構と2.放出後の腫瘍関連マクロファージへの影響を解析する．
本年は上咽頭癌におけるマクロファージ（M1型+M2型，M1型，M2型)の判定のため、M1/M2型マクロファージを解析（マーカー組み合わせ　M1型+M2型：Iba1，M1型：iNOS，M2型：Arginase1）の解析を行い、ウェスタンブロットでの解析も進めた。また、原子間力顕微鏡での撮影の予備検討を行った。そして、マクロファージ細胞株THP-1とLMP1エクソソームの共培養を行い、M1/M2解析も行った。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の研究計画通り本年は進めることができた。

Strategy for Future Research Activity

今後も、マクロファージ研究を精力的に行なっている金沢大学医学系免疫研究室スタッフの助言を仰ぎつつ研究を円滑に進める予定である。ファルネシルトランスフェラーゼの阻害薬は、細胞内のユビキチン機構を変化させ，LMP1がエクソソームにパッキングされるのを阻害される薬剤である．本年は、この薬剤で調整した細胞からのエクソソームでマクロファージ分化誘導の変化があるか確認する．そして、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬とmockで調整したLMP1発現細胞，LMP1非発現細胞，それぞれからのエクソソームを抽出し，フローサイトメトリーでM1型とM2型の解析を行う。