2020 Fiscal Year Research-status Report
咬合性外傷を伴う歯周炎の歯槽骨吸収に対する薬物療法の可能性を探る
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19K19006
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| Research Institution | Meikai University |
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Principal Investigator |
鈴木 允文 明海大学, 歯学部, 助教 (60638518)
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2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 歯周炎 / 外傷性咬合 / メカニカルストレス / 骨芽細胞 / TRPV4 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
歯周炎は歯周病原細菌により引き起こされる感染症であり、炎症が慢性化することで歯槽骨吸収が生じる疾患である。外傷性咬合を伴う歯周炎患者では、局所的な歯槽骨吸収の進行がみられるが、その分子メカニズムには未だ不明な点が多い。本研究では、骨芽細胞に発現するメカニカルストレス応答性イオンチャネルTransient Receptor Potential Vanilloid 4(TRPV4) に着目し、慢性歯周炎存在下での外傷性咬合によって増悪化される歯槽骨破壊の分子メカニズムを解明することで、新たな薬物療法の確立への足掛かりとすることを目的とした。
2020年度は、小型卓上振とう器を用いてマウス頭頂骨由来骨芽細胞に対して外傷性咬合を想定した旋回振とう刺激を負荷する実験を中心に実施した。条件検討の結果、200rpm、20分間の旋回振とう刺激を間欠的に歯周病原細菌Porphyromonas gingivalis（P.g）由来LPS存在下で培養した細胞に対して与えるとRANKL mRNA発現が有意に上昇することが確認できた。さらに同条件下でTRPV4アンタゴニストであるRuthenium redを添加するとRANKL mRNAの発現上昇が有意に抑制された。このことから、P.g由来LPS存在下でメカニカルストレスを負荷することにより生じる骨吸収にTRPV4が関与している可能性が示唆された。
今後は、同条件でのメカニカルストレス負荷実験においてsiRNAを使用し、TRPV4の関与について更なる検討を行う。またTRPV4ノックアウトマウスを用いた歯周炎モデルを作製し、組織学的ならびに形態学的評価を実施する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2019年度はP.g由来LPS存在下で培養した骨芽細胞のTRPV4発現と破骨細胞分化誘導能についての検討を行った。2020年度は小型卓上振とう器によるメカニカルストレスの負荷条件についての検討を実施した。TRPV4選択的アゴニスト4α-PDDの添加により、RANKL発現の亢進がみられたこと、旋回振とう刺激によって生じたRANKL発現上昇がTRPV4アンタゴニストRuthenium redによって抑制されたことから、歯周炎存在下での外傷性咬合による歯槽骨吸収に対してTRPV4が関与している可能性が示唆される結果を得られた。さらにTRPV4 siRNA導入による検討、TRPV4ノックアウトマウスによる歯周炎モデルの作製の準備を行っている段階である。計画に若干の変更はあるものの、現段階においてはおおむね順調に進行しているものと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
2021年度は、2020年度に条件設定を実施したメカニカルストレス負荷実験においてTRPV4の関与について更なる検討を行う。TRPV4 siRNAを導入した骨芽細胞に対して200rpm、20分間の旋回振とう刺激を間欠的に負荷し、RNA mRNA発現に対する影響を定量RT-PCR法によって調べる。さらにTRPV4ノックアウトマウスの臼歯に対して絹糸を結紮することで歯周炎モデルを作製し、歯槽骨吸収度やTRPV4、骨関連マーカーの発現の組織学的評価ならびにマイクロCTを用いた形態学的評価を実施する予定である。現在、野生型マウスを用いた歯周炎モデル作製の予備実験を実施しており、順調に推移している。マイクロCTについては本学共通機器が使用可能である。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルス感染症の影響により予定していた学会参加が見送られたこと、また既存の実験器具、試薬を利用することが可能であったことから、次年度使用額が生じた。
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Research Products
(1 results)
