2019 Fiscal Year Research-status Report
導管結紮による唾液腺再生マウスモデルを用いた再生に関わる遺伝子とmiRNAの同定
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19K19200
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
横田 美保 徳島大学, 病院, 医員 (50836145)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 顎下腺結紮モデルマウス / マイクロアレイ解析 / マイクロRNA / 遺伝子 / 腺房細胞 / 導管細胞 / 再生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Tamarinらの方法に準じてマウス（C57BL/6JJcl, 8週，雌性，日本クレア社）の唾液腺（顎下腺）をチタンクリップ（MINI 17-001-9 5, スギタチタンクリップⅡ）で結紮し、顎下腺結紮モデルマウスを作成した。24時間後、１週間後、１週間結紮して解除3週間後に、この結紮モデルマウスを屠殺し、顎下腺を摘出した。顎下腺の形態学的な変化、ヘマトキシリン・エオジン染色による組織学的な変化を検索した。さらに，コントロールマウスと顎下腺結紮モデルマウスの顎下腺をホモジナイズしてRNAを回収した。cDNAのマイクロアレイ を用いて、遺伝子およびマイクロRNAの発現を解析した。遺伝子およびマイクロRNA発現変化の網羅的解析はtoal RNAを逆転写してcDNAを作製後、Agilent technologies社製 Gene Chip cDNAマイクロアレイキットおよび東レ社製3D Gene Mouse miRNA Oligo chipを用いて解析した。現在、発現変化を認めた候補遺伝子およびマイクロRNAを確認中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスの顎下腺を24時間後、１週間後、１週間結紮して解除3週間後に、摘出した。組織学的変化をH-E染色にて確認すると、マウス顎下腺の導管結紮により、唾液腺腺房細胞が消失した。結紮を解除すると、腺房細胞が正常に近い状態まで回復していた。また、マイクロアレイ解析を行い、唾液腺組織における遺伝子およびマイクロRNAの発現変化を確認している。
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| Strategy for Future Research Activity |
摘出した顎下腺組織について、導管のマーカーであるEGFR、腺房細胞のマーカーであるαアミラーゼ、アクアポリン５の発現について検索する。また、唾液腺の幹細胞マーカーと考えられているPSCA、DN63p、kc-kit、Lgr5の発現について経時的に検討する。また，マイクロアレイ解析で候補となった遺伝子およびマイクロRNAについて、リアルタイムPCR法を用いて発現を確認する。
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| Causes of Carryover |
（次年度使用額が生じた理由）マイクロアレイ解析による候補遺伝子およびマイクロRNAを確認中であり、リアルタイムPCR法による定量には至っておらず、次年度の課題とした。そのため、リアルタイムPCRに使用する試薬・機器の購入ができていないためである。
（使用計画）遺伝子およびマイクロRNAの発現変化を確認し、候補となった遺伝子およびマイクロRNAについてリアルタイムPCRで定量を行う。リアルタイムPCRに使用する試薬・機器の購入を予定している。
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Research Products
(3 results)
