重症熱性血小板減少症候群に特徴的な異形リンパ球と、末梢血単核球の関連性を解明する

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18H06152
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: National Institute of Infectious Diseases
• Principal Investigator: 和田 雄治 国立感染症研究所, 感染病理部, 研究員 (60825248)
• Project Period (FY): 2018-08-24 – 2020-03-31
• Keywords: 重症熱性血小板減少症候群 / 新興感染症 / ダニ媒介性ウイルス / 人獣共通感染症

Outline of Annual Research Achievements

重症熱性血小板減少症候群（SFTS）はブニヤウイルス科フレボウイルス属に属するSFTSウイルス（SFTSV）の感染により惹起されるダニ媒介性の新興感染症である。SFTSは人に致死的な症状を引き起こすが、その病態形成機序は依然として未解明であり、効果的な対応策の設立を困難としている。本研究室のこれまでの研究活動により、SFTS患者のリンパ組織及び末梢組織中に特徴的な形質芽細胞様の異型リンパ球が増生・浸潤している事を明らかとした。本研究は、これら異型リンパ球の発現・増生・浸潤機序にヒト末梢血単核球（PBMC）が果たす役割の解明を試みるものであり、2018年度に実施した研究活動により下記の成果を得た。
（研究1：健常者の末梢血単核球（PBMC）に含まれるSFTSV感受性細胞の探索とSFTSV感染により惹起される免疫細胞応答の観察）SFTSV感染細胞内に最も多量に発現する事が知られているSFTSV-nucleoprotein（SFTSV-NP）を標的とする遺伝子組換えモノクローナル抗体を作成した。本抗体を用いて、健常者PBMCを用いたSFTSV感染試験系を構築した。さらに、SFTSV感染時及び非感染時におけるPBMCのリンパ球サブセットの解析を実施した結果、SFTSV感染PBMCにおいて特徴的な表現型を有するリンパ球が出現する可能性が示唆された。
（研究２：急性期SFTS患者のPBMCに含まれるSFTSV感染細胞及び異形リンパ球の表現型解）SFTS流行地域の病院に勤務する臨床医の協力のもと、急性期SFTS患者のPBMCを分離し、凍結保存細胞1検体を収集した。検体の収集数が想定より少なかった為、2019年度においても引き続き検体収集を実施する予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

（研究1）SFTSV-NPを標的とする遺伝子組換えモノクローナル抗体の作成、及び健常者PBMCを用いたSFTSV感染試験系の構築に成功した。さらに、SFTSV感染時のPBMC中に特徴的な表現型を有するリンパ球が存在する可能性が示唆された。これら特徴的な表現型を有するリンパ球を詳細に解析する事により、異型リンパ球の出現機序の解明に寄与する知見の獲得が期待される。以上より、2018年度における本研究は当初の計画以上に進展していると考えられる。
（研究2）少ない検体数であるが、急性期SFTS患者のPBMC検体を収集する事に成功した。検体収集はやや遅れているが、（研究１）の項に記載したように、各試験系の構築は順調に進展している為、2018年度における本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。
総じて、2018年度における本研究の進捗は、おおむね順調であるといえる。

Strategy for Future Research Activity

（研究1）2018年度に引き続き、SFTSV感染PBMCに特徴的に観察されるリンパ球の表現型を詳細に解析する。また、PBMC中に含まれる各リンパ球サブセット（T細胞、B細胞等）の分離・培養・SFTSV感染試験系を構築し、SFTSV感染PBMC中に観察される特徴的なリンパ球の出現機序の解明を試みる。
（研究2）2018年度に引き続き、急性期SFTS患者のPBMC検体を収集する。また、（研究1）により得られた知見を活用し、SFTSV-NP及び各種細胞表面マーカーを指標とするフローサイトメトリー法により、急性期SFTS患者のPBMC中に存在するSFTSV感染細胞及び異型リンパ球の表現型を解析する。