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2019 Fiscal Year Research-status Report

生体試料の深部のクライオ1分子イメージング

Research Project

Project/Area Number 19K22162
Research InstitutionTokyo Institute of Technology

Principal Investigator

藤芳 暁  東京工業大学, 理学院, 助教 (70371705)

Project Period (FY) 2019-06-28 – 2021-03-31
Keywords1分子観察
Outline of Annual Research Achievements

たった一つの生命現象を発現させるためにも、無数の分子が働いている。しかも、これらの分子は単独ではなく、ネットワークをつくり機能している。このような複雑系の実体を理解する第一歩は、その現場である細胞内部や生体組織を分子レベルで画像化し、分子同士の相互作用の様子を分子ごとに知ることである。しかし、世界的に見ても、誰もこのような画像化に成功していない。我々は凍結試料のための蛍光顕微鏡(クライオ蛍光顕微鏡)に注目し、15年間、研究を続けてきた。実に20台のクライオ蛍光顕微鏡を独自開発した結果、世界で最も高いナノメートルの精度で個々の色素の三次元位置を1分子観察することに成功した。ところが、この方法を厚みのある試料(厚さ>10 μm)に用いると、位置決定精度が著しく低下することが分かってきた。これは、試料と空気との界面屈折に由来する収差が原因であることが分かってきた。そこで、当該研究では、界面屈折の影響をゼロにする「可変浸レンズ (Variable Immersion Lens, VIL)」を開発する。これにより、世界初の細胞・組織内の分子レベルイメージングに挑戦する。2019年度にはVILの開発に成功し、特許の出願も済ませている。
VILは我々が開発した反射対物レンズ「虎藤鏡」と組み合わせて使うことで、界面屈折の影響をゼロにできるという特長を持つ。VILは虎藤鏡の焦点を曲率中心としたメニスカスレンズであり、このような形状にすることで虎藤鏡からのすべての入射光線が垂直入射になる。これにより、界面屈折が起こらず、厚みのある試料でも鮮明な画像が取得できる。すでに、直径6ミクロンの蛍光ビーズをテスト試料として実験を行ったところ、既存の共焦点蛍光顕微鏡で問題となっていた画像の歪みを解消できることを実験的にしめすことに成功している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

2019年度には、当該研究の核となる「界面屈折の影響をゼロにする可変浸レンズ (Variable Immersion Lens, VIL)」の開発に取り組み、成功した。すでに、特許の出願も終えており、投稿論文を準備中である。このように、当初の計画以上に進展しており、コロナウィルス感染の影響を加味しても、来年度中に、当初計画を実現できると考えている。

Strategy for Future Research Activity

上に述べたように、2019年度は、当初の計画以上に進展しており、コロナウィルス感染の影響を加味しても、来年度中に、当初計画を実現できると考えている。

  • Research Products

    (10 results)

All 2020 2019

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (7 results) (of which Invited: 1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Aberration-corrected cryogenic objective mirror with a 0.93 numerical aperture2019

    • Author(s)
      Fujiwara Masanori、Ishii Takaki、Ishida Keita、Toratani Yasuharu、Furubayashi Taku、Matsushita Michio、Fujiyoshi Satoru
    • Journal Title

      Applied Physics Letters

      Volume: 115 Pages: 033701~033701

    • DOI

      https://doi.org/10.1063/1.5110546

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Nanometer Accuracy in Cryogenic Far-Field Localization Microscopy of Individual Molecules2019

    • Author(s)
      Furubayashi Taku、Ishida Keita、Kashida Hiromu、Nakata Eiji、Morii Takashi、Matsushita Michio、Fujiyoshi Satoru
    • Journal Title

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      Volume: 10 Pages: 5841~5846

    • DOI

      https://doi.org/10.1021/acs.jpclett.9b02184

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 三次元カメラ共焦点クライオ(C3)蛍光顕微鏡2019

    • Author(s)
      藤芳 暁
    • Organizer
      放射線影響学会
    • Invited
  • [Presentation] 開口数0.93の収差補正クライオ対物鏡の開発2019

    • Author(s)
      石井啓暉, 虎谷泰靖, 藤原正規, 石田啓太, 藤芳暁, 松下道雄
    • Organizer
      日本物理学会秋季大会
  • [Presentation] 高開口数蛍光顕微鏡の界面屈折に由来する収差の研究:メニスカスレンズによる収差補正2019

    • Author(s)
      石田啓太, 藤芳暁, 松下道雄
    • Organizer
      日本物理学会秋季大会
  • [Presentation] 温度安定化循環水によるクライオ蛍光顕微鏡のナノレベル安定化2019

    • Author(s)
      滝島研人, 古林琢, 松下道雄, 藤芳暁
    • Organizer
      日本物理学会秋季大会
  • [Presentation] クライオ蛍光顕微鏡による分子確度イメージングの実現2019

    • Author(s)
      古林 琢、中田栄司、森井孝、藤芳暁、松下道雄
    • Organizer
      分子科学討論会
  • [Presentation] 三次元カメラ共焦点顕微鏡によるクライオ1分子イメージング2019

    • Author(s)
      松田剛、古林 琢、松下道雄、藤芳暁
    • Organizer
      分子科学討論会
  • [Presentation] DNAオリガミを用いたクライオ超解像蛍光イメージング用色素の探索2019

    • Author(s)
      溝内雄太、石井啓暉、中田栄司、森井孝、藤芳暁、松下道雄
    • Organizer
      分子科学討論会
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 顕微鏡2020

    • Inventor(s)
      藤芳暁、石田啓太
    • Industrial Property Rights Holder
      藤芳暁、石田啓太
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      2020-041367

URL: 

Published: 2021-01-27  

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