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2020 Fiscal Year Research-status Report

新規化学スイッチ機構を用いた超解像イメージングプローブ

Research Project

Project/Area Number 19K22255
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

菊地 和也  大阪大学, 工学研究科, 教授 (70292951)

Project Period (FY) 2019-06-28 – 2022-03-31
Keywords光スイッチング / 超解像イメージング / 化学プローブ / RESOLFT
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、新たな蛋白質・合成蛍光プローブのペアを用い、化学原理に基づき蛍光スイッチ機能を持つ超解像イメージングプローブを設計・ 開発することを 目的とする。この目的達成のためには、標的となる生体分子を蛍光色素で特異的に標識し、その色素の蛍光特性を変化させるスイッチ機能が必要である。
今年度は交換可能な蛋白質ラベル化能を有する機能性蛍光プローブの開発を進めた。蛋白質と入れ替わり結合することにより、蛍光スイッチとしてはたらき、その局在を蛍光点滅によって知らせることで1分子単位での検出を可能都市、超解像イメージングへ展開できると考えられる。目的に応じた蛋白質ラベル化プローブの設計にあたり、ラベル化するためのタグとしてOdorant Binding Protein(OBP)を選択した。OBPはバレル構造の内部に疎水性分子を可逆的に結合するポケットを有しており、発現が鼻粘液に限局しているため多くの哺乳類細胞で内在性蛋白質と干渉することなく用いることができる。このポケットに結合するプローブとして、OBPリガンドである脂肪酸に環境感受性の蛍光分子であるジメチルアミノクマリン、及びその誘導体を連結させた分子を合成した。プローブを組み換え蛋白質として精製したOBPと混ぜた際に蛍光強度が大きく上昇することを確認した。また、結合親和性を測定したところ、マイクロMオーダーの結合が見られ、交換可能なラベル化という目的に沿った性質を示すことが分かった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

交換可能な蛋白質ラベル化による蛍光スイッチングを可能にする新たなプローブ分子の開発を達成できた。蛍光強度、結合能としては適した性質のものが得られており、順調に研究が進展していると考える。

Strategy for Future Research Activity

今後は、これまでに開発した蛋白質・合成蛍光プローブのペアを用い、化学原理に基づき蛍光スイッチ機能を持つ超解像イメージングへの応用を進める。OBPを用いた蛋白質ラベル化については、ガラス基板上に固定したOBP分子に低濃度のプローブを添加し、蛍光の点滅に由来する1分子イメージングを行う。得られたデータを解析し結合、解離における速度を最適化する。その後、細胞内蛋白質の超解像イメージングへと展開する。加えて、光異性化によって消光能を制御する原理に基づいた新たな蛍光スイッチング分子の開発に取り組む。異性化によって吸収スペクトルが変化する分子を利用し、FRETにおける重なり積分の変化によって蛍光強度がスイッチするプローブを設計、合成する。

Causes of Carryover

新型コロナウイルスの影響で出張機会が大幅に減少し、次年度使用額が生じた。次年度では研究推進のための物品購入を中心に使用する予定である。

  • Research Products

    (13 results)

All 2021 2020

All Journal Article (10 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results,  Peer Reviewed: 10 results,  Open Access: 6 results) Presentation (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 1 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Near-infrared fluorescent probes: a next-generation tool for protein-labeling applications2021

    • Author(s)
      Reja Shahi Imam、Minoshima Masafumi、Hori Yuichiro、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      Chemical Science

      Volume: 12 Pages: 3437~3447

    • DOI

      10.1039/D0SC04792A

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Optical Manipulation of Subcellular Protein Translocation Using a Photoactivatable Covalent Labeling System2021

    • Author(s)
      Kowada Toshiyuki、Arai Keisuke、Yoshimura Akimasa、Matsui Toshitaka、Kikuchi Kazuya、Mizukami Shin
    • Journal Title

      Angewandte Chemie International Edition

      Volume: 60 Pages: 11378~11383

    • DOI

      10.1002/anie.202016684

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Fluorogenic probes for detecting deacylase and demethylase activity towards post-translationally-modified lysine residues2021

    • Author(s)
      Hori Yuichiro、Nishiura Miyako、Tao Tomomi、Baba Reisuke、Bull Steven D.、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      Chemical Science

      Volume: 12 Pages: 2498~2503

    • DOI

      10.1039/D0SC06551J

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] A step towards gadolinium-free bioresponsive MRI contrast agent2021

    • Author(s)
      Wyskocka-Gajda Marzena、Przypis Lukasz、Olesiejuk Monika、Krawczyk Tomasz、Kuznik Anna、Nawara Krzysztof、Minoshima Masafumi、Sugihara Fuminori、Kikuchi Kazuya、Kuznik Nikodem
    • Journal Title

      European Journal of Medicinal Chemistry

      Volume: 211 Pages: 113086~113086

    • DOI

      10.1016/j.ejmech.2020.113086

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Single-cell dynamics of pannexin-1-facilitated programmed ATP loss during apoptosis2020

    • Author(s)
      Imamura Hiromi、Sakamoto Shuichiro、Yoshida Tomoki、Matsui Yusuke、Penuela Silvia、Laird Dale W、Mizukami Shin、Kikuchi Kazuya、Kakizuka Akira
    • Journal Title

      eLife

      Volume: 9 Pages: e61960

    • DOI

      10.7554/eLife.61960

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] An Acid‐Activatable Fluorescence Probe for Imaging Osteocytic Bone Resorption Activity in Deep Bone Cavities2020

    • Author(s)
      Hashimoto Ryu、Minoshima Masafumi、Kikuta Junichi、Yari Shinya、Bull Steven D.、Ishii Masaru、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      Angewandte Chemie International Edition

      Volume: 59 Pages: 20996~21000

    • DOI

      10.1002/anie.202006388

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] A Photodeactivatable Antagonist for Controlling CREB-Dependent Gene Expression2020

    • Author(s)
      Imoto Takuma、Minoshima Masafumi、Yokoyama Tatsushi、Emery Ben P.、Bull Steven D.、Bito Haruhiko、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      ACS Central Science

      Volume: 6 Pages: 1813~1818

    • DOI

      10.1021/acscentsci.0c00736

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Oxygen Functional Groups on MWCNT Surface as Critical Factor Boosting T2 Relaxation Rate of Water Protons: Towards Improved CNT-Based Contrast Agents2020

    • Author(s)
      Tomczyk Mateusz Michal、Boncel Slawomir、Herman Artur、Krawczyk Tomasz、Jakobik-Kolon Agata、Pawlyta Miroslawa、Krzywiecki Maciej、Chrobak Artur、Minoshima Masafumi、Sugihara Fuminori、Kikuchi Kazuya、Kuznik Nikodem
    • Journal Title

      International Journal of Nanomedicine

      Volume: 15 Pages: 7433~7450

    • DOI

      10.2147/IJN.S257230

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Rapid no-wash labeling of PYP-tag proteins with reactive fluorogenic ligands affords stable fluorescent protein conjugates for long-term cell imaging studies2020

    • Author(s)
      Kumar Naresh、Hori Yuichiro、Nishiura Miyako、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      Chemical Science

      Volume: 11 Pages: 3694~3701

    • DOI

      10.1039/D0SC00499E

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Development of Photoswitchable Fluorescent Molecules Using Arylazopyrazole2020

    • Author(s)
      Torii Kenji、Hori Yuichiro、Watabe Keiichiro、Kikuchi Kazuya
    • Journal Title

      Bulletin of the Chemical Society of Japan

      Volume: 93 Pages: 821~824

    • DOI

      10.1246/bcsj.20200077

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] in vivo Imaging Probes to Clarify Cellular and Molecular Functions2020

    • Author(s)
      Kazuya Kikuchi
    • Organizer
      RSC Tokyo International Conferences 2020
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Book] 核酸科学ハンドブック(第5章2 MRIプローブ)2020

    • Author(s)
      蓑島維文、菊地和也
    • Total Pages
      576
    • Publisher
      講談社
    • ISBN
      978-4-06-520786-4
  • [Patent(Industrial Property Rights)] ケージド化合物から化合物を放出させる方法2021

    • Inventor(s)
      蓑島維文、橋本 龍、菊地和也
    • Industrial Property Rights Holder
      蓑島維文、橋本 龍、菊地和也
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2021-022014

URL: 

Published: 2021-12-27  

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