2019 Fiscal Year Research-status Report
接着斑細胞膜は特殊な膜領域で細胞機能を調節するか？
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19K22279
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
木岡 紀幸 京都大学, 農学研究科, 教授 (90234179)
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| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2022-03-31
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| Keywords | 接着斑 / 細胞外マトリックス / 細胞膜 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生体内ではコラーゲンをはじめとする細胞外基質が動物細胞を取り囲んでいる。この細胞外基質の種類や濃度、硬さなどの細胞外環境が、炎症や脂肪細胞分化、がん細胞遊走などの細胞機能を調節している。細胞外環境の感知と情報伝達には、細胞と細胞外基質との接着部位に形成される巨大複合体接着斑が重要であり、これまでに、接着斑局在タンパク質(細胞外基質受容体やキナーゼ)の重要性が示され、接着斑タンパク質を抑制することでがんや炎症性疾患、硬化症の治療が試みられている。一方で接着斑のもう一つの主要な構成因子である接着斑細胞膜はこれまでほぼ完全に見過ごされてきた。最近、接着斑を構成する細胞膜は脂質ラフト様 (ordered membrane)であることが顕微鏡観察により報告された。また申請者らは細胞外基質の硬さにより接着斑タンパク質が脂質ラフト膜(界面活性剤不溶性膜)に増加することを示し、そのことが細胞外基質の硬さによる細胞遊走の調節に必要なことを見出した。そのことから、接着斑の機能には接着斑細胞膜脂質が重要であると考え、その検証を行っている。今年度は、接着斑の細胞膜を単離できるための条件検討を行い、これまでに適切な条件を見出した。単離した細胞膜脂質のコレステロールとホスファチジルコリンを酵素法により定量したところ、接着斑細胞膜では細胞全体の膜に比べコレステロールの比率が高いことが示された。現在は比較対象とすべき細胞膜を抽出する条件を検討中である。また、接着斑細胞膜を改変する実験系を構築するために、予備実験を行い蛍光タンパク質を接着斑に局在化させることに成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現在までに接着斑細胞膜を単離する実験系の構築に成功しており、順調に進んでいる。また接着斑細胞膜を改変するための予備実験も計画通り進んでおり、順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
接着斑の細胞膜と比較対象とすべき接着斑以外の細胞膜を単離する必要がある。１９年度にいくつかの手法を試みたが、細胞内膜の混入が多い、など問題があった。２０年度は新しい手法を検討する。
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| Causes of Carryover |
本年度は、接着斑細胞膜の単離条件の検討に予想以上に時間がかかったため、その後に使用する予定であった消耗品費が次年度の使用にまわった。また年度末に情報収集のために参加予定であった研究会がコロナのため中止となり、そのための旅費は次年度の情報収集に使用することとした。
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