2021 Fiscal Year Research-status Report

トキソプラズマ潜伏により誘導される抗ウイルス応答：原虫とウイルスの攻防を紐解く

Research Project

Project/Area Number	19K22354
Research Institution	Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
Principal Investigator	玄学南帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (10292096)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	正谷達謄鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (70614072)
Project Period (FY)	2019-06-28 – 2023-03-31
Keywords	トキソプラズマ / タキゾイト / ブラディゾイト / ステージ変換 / 抗ウイルス / 自然免疫
Outline of Annual Research Achievements	本研究では、培養細胞や実験動物を用いた原虫-ウイルス共感染実験によって、トキソプラズマ潜伏感染がウイルスの増殖や病原性に及ぼす影響を明らかにすることを目的とする。当該年度に得られた成果は下記の通りである。１）インターフェロン関連遺伝子のノックアウト細胞を作出する目的で、Nucleofector機器を用いてヒト線維芽細胞にCRISPR/Cas9プラスミドを導入した。効果的に遺伝子導入が行われたものの、増殖が悪くクローニングにはいたらなかった。現在、ウイルスベクターなどを使用した遺伝子導入を行うべく、条件を検討している。２）マウスにトキソプラズマを感染させ、30日飼育することで潜伏感染マウスモデルを作出した。正常なマウスと潜伏感染マウスの脳における自然免疫関連遺伝子の発現をリアルタイムPCRにより検証した結果、いずれの遺伝子も潜伏感染で上昇が見られた。すなわち、これまでヒト線維芽細胞でみられた自然免疫関連遺伝子の上昇という現象が、in vitroだけでなくマウス脳でも起こっていることが確認できた。３）トキソプラズマ側の責任遺伝子を同定する目的で、ブラディゾイト特異的遺伝子の発現ライブラリを作製している。一方、「インターフェロンシグナルが活性化した場合蛍光する細胞」についても現在樹立を試みている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 当初の計画通りに進展し、所期の成果が得られたため。
Strategy for Future Research Activity	インターフェロン受容体ノックアウトマウスを用いて、抗ウイルス免疫誘導のメカニズム解析を行う。
Causes of Carryover	理由：新型コロナウイルス感染症の影響を受け、一部の実験の実施に遅延が発生したため。計画：インターフェロン受容体ノックアウトマウスを用いて、抗ウイルス免疫誘導のメカニズム解析を行う。