2020 Fiscal Year Research-status Report
「ユビキチンコード」解明へ向けたポリユビキチン化基質の網羅的同定
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19K22408
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
渡部 昌 北海道大学, 医学研究院, 講師 (10632424)
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2019-06-28 – 2022-03-31
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| Keywords | ユビキチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①K63ポリユビキチン鎖を特異的に捕獲する新規プローブの作製： K63鎖を特異的に認識するヒト遺伝子由来のドメインを直列に４つ、柔軟性の高いポリグリシンのリンカーで連結した。大腸菌を利用してこのプローブタンパク質を作製することができたため、各鎖との結合特異性をテトラユビキチン鎖(M1, K6, K11, K29, K33, K48, K63鎖)を用いたプルダウン法によって検証を行ったところ、K63鎖特異的な強い結合を認めた。
②K63ポリユビキチン鎖を特異的に捕獲する新規プローブの作製： 前項とは別種のK63鎖を特異的に認識するヒト遺伝子由来のドメインを直列に４つ、柔軟性の高いポリグリシンのリンカーで連結した。大腸菌を利用してこのプローブタンパク質を作製することができたため、各鎖との結合特異性をテトラユビキチン鎖(M1, K6, K11, K29, K33, K48, K63鎖)を用いたプルダウン法によって検証を行ったところ、弱いながらもK63鎖特異的な結合を認めた。
③M1ポリユビキチン鎖を特異的に捕獲する新規プローブの作製： M1鎖を特異的に認識するヒト遺伝子由来のドメインを直列に４つ、柔軟性の高いポリグリシンのリンカーで連結した。大腸菌を利用してこのプローブタンパク質を作製することができたため、各鎖との結合特異性をテトラユビキチン鎖(M1, K6, K11, K29, K33, K48, K63鎖)を用いたプルダウン法によって検証を行ったが、ユビキチン鎖との結合を認めなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画していた実験が概ね遂行できており、今年度に得られた知見を元に来年度もさらに研究を進展させる段階にあるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
K63鎖特異的プローブについては、さらに検証を進め、細胞内からK63鎖が付加された基質の同定を進めていく。また他の結合ドメインを利用したプローブの作製を順次試みる。
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