2019 Fiscal Year Research-status Report
細胞内動態の網羅的イメージングとホームメイド薬剤による植物の不等分裂機構の解明
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19K22421
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
植田 美那子 名古屋大学, 理学研究科(WPI), 特任講師 (20598726)
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| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2021-03-31
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| Keywords | 植物 / ライブイメージング / 化合物スクリーニング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
受精卵の極性化と不等分裂は、個体発生の原点である。しかし植物では、受精卵内部でどのような因子が、どのような現象を制御するのか、いまだほとんど分かっていない。制御因子が得られていない理由としては、遺伝子の冗長性や、遺伝子欠損株の致死性のせいで、重要な機能を担う因子の欠損株が得られにくいことが考えられている。また、細胞内現象が分かっていない理由としては、被子植物の花の奥深くに存在する受精卵の内部を生きたまま観察する手法がなかったことが理由である。そんななか、研究代表者らはシロイヌナズナを用いて、植物の受精卵の内部を高精細にライブイメージングできる方法論を世界で初めて構築した（Ueda et. al., 2020）。加えて、従来の遺伝学的スクリーニングの弱点であった、冗長性や致死性を回避して重要な制御因子を探索できる手法として化合物スクリーニングを網羅的に行った結果、受精卵の不等分裂を阻害する新規の薬剤を見出した。高感度質量分析を行って標的因子を同定するとともに、得られた因子の細胞内動態をライブイメージングした結果、特異的なリン酸化酵素とその標的因子によって、受精卵が不等分裂する際の細胞板の形成が制御されることを突き止めた。これらの成果について、現在論文を執筆中である。さらに、研究代表者が確立した新規ライブイメージング手法や見出した細胞内動態について、多くの国内外の学会で発表するとともに、学術誌での公表にも至った（Kimata and Ueda, 2020）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究代表者らが独自に立ち上げた植物受精卵の精緻なライブイメージング系について、その方法論だけでなく、見出した現象についても成果発表に至った。加えて、化合物スクリーニングによって得られた新規因子の解析により、細胞分裂の制御機構が明らかになりつつある。
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| Strategy for Future Research Activity |
化合物スクリーニングによって得られた制御因子と、それを調節するリン酸化酵素の関係性を明らかにする。具体的には、精製したタンパク質を用いたキナーゼアッセイや、タンパク質の結合のを判定できるBiFCアッセイを行う。さらに、受精卵が不等分裂する動態を可視化したライブイメージングマーカー株にこの阻害剤を投与することで、細胞板の制御機構が不等分裂に果たす役割を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
植物栽培室に害虫が想定外に大量発生したために、ライブイメージングに使用する予定の植物を廃棄して栽培し直すことになった。次年度には、受精卵の核や細胞骨格を蛍光標識したさまざまなライブイメージングマーカー株を栽培して細胞板の阻害剤を投与し、細胞板の適切な制御が受精卵の不等分裂に果たす役割を明らかにする。
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[Presentation] Live-cell imaging of the polarization dynamics of Arabidopsis zygote2019
Author(s)
Yusuke Kimata、Takehide Kato、Takumi Higaki、Daisuke Kurihara、Tomomi Yamada、Shoji Segami、Miyo Terao Morita、Masayoshi Maeshima、Seiichiro Hasezawa、Keiko Kuwata、Ayato Sato、Takamasa Suzuki、Moe Yamada、Tomokazu Kawashima、Frederic Berger、Yoshikatsu Sato、Masao Tasaka、Tetsuya Higashiyama、Minako Ueda
Organizer
Principles of Pluripotent Stem Cells Underlying Plant Vitality
Int'l Joint Research / Invited
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