自己末梢血単核球の効率的な定着による重症下肢虚血の治療

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K23615
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 東 倫之 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 研究所, 流動研究員 (70846534)
• Project Period (FY): 2019-08-30 – 2021-03-31
• Keywords: 細胞移植 / 血管新生 / 重症下肢虚血 / ゲル / パラクリン

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、移植した末梢血単核球が放出するサイトカイン、液性因子による重症下肢虚血治療である。末梢血単核球のハイドロゲル包埋により移植細胞の遊走を阻害し、移植部位に高効率に長期間留まることで、末梢血単核球が放出するサイトカイン、液性因子によるパラクリン効果増強が期待できる。これまでに、末梢血単核球の回収・評価およびラット重症下肢虚血モデルの作製・評価法の確立を行った。まず、SDラット(10週齢、♂)から末梢血単核球をFicoll法により回収した。血球計数装置での評価により単核球成分が83±3%から96±2%に濃縮されることが分かった。次に、SDラット(８週齢、♂)の腸骨動脈を二重結紮し、大腿動脈・大腿深動脈を単結紮することで、重症下肢虚血モデルを作製した。血色不良ならびに60-70%程度の慢性的な血流の低下(レーザースペックル血流計による)を確認した。また、結紮10日後に5.0x10^6個の末梢血単核球を大腿筋に移植した場合、結紮28日後には未投与群と比較して50%程度の血流改善が見られた。本年度は、末梢血単核球のハイドロゲル包埋を行った。Cell-in-a-Boxというキットを用いて実施した。本ハイドロゲルは硫酸セルロースおよびカチオン性ポリマーがベースとなっている。本キットにより末梢血単核球がハイドロゲルで包埋できること、およびゲル包埋に伴う生存率の低下が見られないことが分かった。本年度はCovid-19に伴う緊急事態宣言もあり、移植まで進めることは出来なかった。