2020 Fiscal Year Research-status Report
Understanding molecular mechanisms that regulate neuronal diversity using DamID technique
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19K23739
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| Research Institution | Ibaraki University |
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Principal Investigator |
鈴木 匠 茨城大学, 理工学研究科(理学野), 助教 (30623764)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2022-03-31
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| Keywords | 神経幹細胞 / DamID / ショウジョウバエ / 視覚中枢 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は、昨年度に作成した発現コンストラクトを用いてDamID法の実施に必要なトランスジェニック系統を作出した。中期の神経幹細胞で発現する転写因子Slp1のDamID系統についてはすでにトランスジェニック個体が得られており、DamID解析の準備が完了しつつある。しかしながら、古い幹細胞で発現しているDのDamID系統については、トランスジェニック系統が得られなかった。
また、Dam融合タンパク質を任意の細胞で、任意の発生ステージで発現させるGal4系統のスクリーニングを継続して行った結果、前方の幹細胞でのみ特異的に発現している系統を１種類、後方の幹細胞でのみ発現している系統を2種類、それぞれ同定した。前方の幹細胞でのみ発現している系統は、特に中間期以降の幹細胞での発現が強く、Ey, Slp, DのDamID解析に非常に適している系統であった。また、後方の幹細胞で特異的に発現している系統では、全時期にわたって発現が見られるものとSlp発現時期移行の幹細胞でのみ発現が見られるものであった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
解析に必要な系統がすでに作出できており、少なくともSlp1については、DNA結合パターンの解析が可能な状態になっている。この系統を用れば、前方の幹細胞、後方の幹細胞においてSlp1のDNA結合パターンを比較でき、それぞれの領域で異なる神経が生み出される仕組みを解析できる。このように、３つの解析対象遺伝子のうち１つの解析が実行可能な状態となっているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度作出したSlp1-Dam系統と前方、後方の幹細胞を特異的に操作可能なGal4系統を用いて、実際のDamID解析を行う。また、今年度作出できなかったD-Dam系統について、発現コンストラクトを導入する領域を変更して（別の染色体など）再度トランスジェニック系統の作出を試みる。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウィルスの蔓延により解析に遅れが生じており、次世代シークエンス解析用の試料調製が年度内に完了しなかったため。すでに試料の調製は完了しているため、次年度に次世代シークエンス解析を行う。
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