2021 Fiscal Year Annual Research Report
革新的なHIV治癒戦略をめざした新規HIV-1感染制御宿主因子の探索同定
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19K23860
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
助川 明香 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教 (40844379)
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| Project Period (FY) |
2020-02-01 – 2022-03-31
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| Keywords | HIV-1 / 宿主因子 / 感染制御 / エイズ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
所属研究室では、HIV-1感染標的細胞である3種のTリンパ球細胞におけるHIV-1感染感受性の違いを見出しており、HIV-1感染低感受性細胞において逆転写初期過程のウイルスcDNA合成量の顕著な低下を認めている。そこで本研究では、これらTリンパ球細胞の性状解析により、HIV-1感染増殖伝播を制御する新たな宿主側要因を探索同定し、それらの機能解析をおこなうことで、これまでにない新たなHIV治療法の開発を目的とした。
まず、HIV-1感染感受性の異なるTリンパ球細胞の性状解析を目的とした(i)異核共存体（ヘテロカリオン）を用いたHIV-1感染実験、(ii)mRNA発現動態差異の見極めを目的としたマイクロアレイ解析、の異なる2つの実験結果を基に、29種類の宿主因子をHIV-1感染抑制候補因子として選定した。
次に、これら宿主候補因子の特異的かつ安定的発現制御(ノックダウン)細胞を各宿主因子に対して、2-3種類の異なる領域を標的としたshRNAを用いて樹立し、HIV-1感染効率の変化の有無を評価した。ルシフェラーゼ遺伝子が挿入されたVSVGシュードタイプのウイルスを感染させ、親株と比較して2.5倍以上のルシフェラーゼ発現上昇を認めた6種類の宿主因子を選定した。これら宿主因子に対して、mRNA量の定量を目的として、one-step RT-PCRの条件検討をおこない、条件が決定した3種の宿主因子に対して、ウイルス感染実験およびmRNA量の定量をおこなった。
結果、宿主因子AおよびBは、mRNA量の低下に伴い、VSVGシュードタイプおよびウイルスエンベロープを介して感染が成立するHIV-1共に、感染効率の上昇が認められたことから、ウイルス侵入後の過程において感染感受性が規定されていることが示唆された。現在は、再構築細胞を樹立し、HIV-1感染効率復帰の有無について検討している。
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