2019 Fiscal Year Research-status Report
血管内皮ミトコンドリアSirt3を標的としたARDS後肺線維症治療法の探索
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19K23980
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
鈴木 敏夫 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70771856)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2021-03-31
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| Keywords | 肺線維症 / 内皮間葉転換 / ミトコンドリア / 酸化ストレス / 形質転換 / 血管内皮細胞 / Pulmosphere / 癌微小環境 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
まず、冷凍保存してある肺線維症患者肺と健常ドナー肺体よりミトコンドリアを単離し、Sirt3発現量の比較を遺伝子・蛋白レベルで行った。肺線維症においてSirt3発現が低下しており、肺パラフィン切片を用いた免疫染色でもそれが明らかになった。
次に、Sirt3の脱アセチル化ターゲットである抗酸化遺伝子のIDH2とSOD2の発現について、肺線維症患者肺と健常ドナー肺検体でウエスタンブロッティング法を用いて検討した。肺線維症においては、Sirt3減少に伴い、抗酸化遺伝子活性の低下を認め、それにより細胞内のROS上昇が観察された。さらに、Sirt3遺伝子発現が肺血管内皮細胞のミトコンドリアDNAの傷害の程度に関与しているかについて検討を行った。具体的には、siRNAでSirt3をノックダウンした肺血管内皮 細胞をH2O2で刺激した後、細胞を回収し、ミトコンドリアDNAをリアルタイムPCRを使って増幅・定量を行い、現在データ検証中である。また、Sirt3遺伝子発現が肺血管内皮細胞のEndMTに与える影響について検討を行った。我々の既報の通り、H2O2でヒト肺血管内皮細胞にEndMTを誘 導できる事は証明できている為 (Suzuki T, et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2016)、同様の刺激をsiRNAによってSirt3 をノックダウンした細胞にも与え、コントロール細胞と比較した。Sirt3-siRNAによってミトコンドリアDNA損傷が増加し、 EndMT発生率も上昇した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究代表者の所属機関異動はあったものの、当初予定していた研究計画はおおむね予定通り遂行できている。
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| Strategy for Future Research Activity |
肺線維症モデルを適用した血管内皮特異的Sirt3ノックアウトマウス及びSirt3 過剰発現マウスの解析と肺線維症ヒト肺検体から作成した3D-pulmosphereを用いた検討 を令和２年度に実施する予定である。
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| Causes of Carryover |
研究代表者鈴木敏夫は2019年9月に前所属先である千葉大学から筑波大学に異動となったため、異動後、直ちに研究活動を開始させることができず、一部の予算について次年度繰り越しとなった。2019年度はin vitroの実験を優先させ、令和2年度よりin vivoのお金を要する実験を開始するので、トータルとして使用する金額に変更はない予定である。
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