2019 Fiscal Year Research-status Report
導出リンパ管・集合リンパ管の作製とリンパ管形成に関わる因子の同定
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19K24252
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
中島 由加里 金沢大学, 保健学系, 助教 (40846680)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2021-03-31
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| Keywords | 培養リンパ管 / リンパ浮腫 / 脂肪組織由来間葉系幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、3次元培養にて導出リンパ管作製を目指した。具体的にはまず、脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いて、三次元培養にて毛細リンパ管作製を行った。3次元培養の手法として、細胞表面にフィブロネクチンとゼラチンをコーティングし、細胞を積層させるLayer-by-Layer（LbL、細胞積層法）を用いた。しかしながら、LbL後、3日間サンプルをインキュベーションすると、細胞はほとんど死んでしまい、多層構造とならず、組織学的な評価も困難であった。
これを解決するために、LbLのプロトコルの見直しと改良を行った。具体的には、細胞比率、使用細胞種、コーティング、使用培地について、条件検討を行った。その結果、播種した細胞のほとんどが生着し、多層構造をもつ立体組織を構築できた。脂肪組織由来間葉系幹細胞が多すぎる場合、細胞同士が接着せず、浮遊して細胞死に繋がってしまうことが考えられた。
細胞死に対する問題はクリアできたため、現在は、より管腔形成を促進する条件の検討を行っている。作製した組織は、リンパ管内皮細胞マーカーであるLYVE-1のホールマウント染色と免疫染色を行い、管腔形成の評価を実施している。
これと同時に、導出リンパ管作製の条件検討も実施している。導出リンパ管作製のためには、培養毛細リンパ管の管腔周囲を1～2層程度の平滑筋細胞が取り囲む必要がある。平滑筋細胞、脂肪組織由来間葉系幹細胞の共培養を行うため、使用培地、細胞比率、培養期間について条件検討を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
3次元培養において、細胞死が多い原因が特定でき、解決方法を見つけられたため、次のステップへと進むことができている。
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| Strategy for Future Research Activity |
基本的に、当初の計画通りに進める。導出リンパ管を作製し、その後培養上清の網羅的解析を行い、リンパ管形成に関わる因子を同定する。
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| Causes of Carryover |
2020年3月8～12日に予定していた国際学会（World Union Wound Healing Society 2020）の開催が2021年9月へ延期となり、学会へ参加する必要がなくなったため、この期間に実験を行うための消耗品を購入し、その結果、85,293円の未使用額が生じた。この未使用額は、初代培養細胞1バイアル程の価格である。
次年度、初代培養細胞1バイアルを追加で購入し、実験は申請計画通りに進め、必要となる成長因子や抗体、培地、フラスコ等の消耗品の購入に充てる予定である。
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[Journal Article] Factors affecting superficial vein visibility at the upper limb in healthy young adults: A cross-sectional observational study2020
Author(s)
Mukai K, Fujii T, Nakajima Y, Ishida A, Kato M, Takahashi M, Tsuda M, Hashiba N, Mori N, Yamanaka A, Nakatani T
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Journal Title
Journal of Vascular Access
Volume: in press
Pages: 1-8
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Anatomically safe sites for intramuscular injections: a cross-sectional study on young adults and cadavers with a focus on the thigh.2019
Author(s)
Nakajima Y, Fujii T, Mukai K, Ishida A, Kato M, Takahashi M, Tsuda M, Hashiba N, Mori N, Yamanaka A, Ozaki N, Nakatani T
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Journal Title
Human Vaccines & Immunotherapeutics
Volume: 16
Pages: 189-196
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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