生体骨格筋におけるマイクロRNAの代謝動態の解析

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K24293
• Research Institution: Waseda University
• Principal Investigator: 及川 哲志 早稲田大学, スポーツ科学学術院, 助教 (20844997)
• Project Period (FY): 2019-08-30 – 2021-03-31
• Keywords: マイクロRNA / RNA代謝 / 骨格筋 / 新生RNA / in vivo

Outline of Annual Research Achievements

マイクロRNAはタンパク質に翻訳されない低分子RNAであり，転写後調節によってタンパク質の発現量を抑制する．これまでに我々は，マウスの骨格筋中に発現する複数のマイクロRNAが，極めて安定に発現している可能性を見出した．マイクロRNAの代謝に関しては，培養細胞を用いて解析を行った報告が散見されるが，in vivoでマイクロRNAの代謝動態について検討した報告はない．そこで本研究では，新たに生成されたマイクロRNAをラベリング・追跡する技術を用いて，生体骨格筋におけるマイクロRNAの代謝動態（半減期）を明らかにすることを目的として検討を行っている．
本年度は，マイクロRNAを標識するため，新生マイクロRNAに取り込まれるウリジン類似体：5-Ethynyl uridine（EU）の投与量およびマウスに対する毒性，マイクロRNAのラベリング効率を検討した．はじめに複数の濃度（1~5mg）の5-EUを野生型マウスの腹腔内へ投与し，体重および生存期間を経時的に観察した．これによりマウスへの毒性が認められない濃度条件を決定した．次に複数の濃度（1~5mg）の5-EUを野生型マウスへ投与し，3，5，8時間後に骨格筋を回収した．これらからRNAを抽出した後，クリック反応によって5-EUが取り込まれたマイクロRNAを単離し，リアルタイムPCRによってそれらの発現を定量することで，新生マイクロRNAの経時的変化およびラベリング効率を決定した．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の計画通り，本年度は骨格筋マイクロRNAの代謝動態を明らかにするための条件検討を行い，マウスに対する毒性および骨格筋における新生マイクロRNAのラベリング効率を決定することができた．

Strategy for Future Research Activity

本年度に決定した実験条件を参考とし，野生型マウスおよび２系統の遺伝子改変マウスを用いてマイクロRNAの代謝動態を検討する．

Causes of Carryover

計画していた研究が当初の想定よりも順調に進行し，予定していた予算額と実際の使用額に少々差額が生じたため，来年度購入予定である試薬などの消耗品費として補填する．