2020 Fiscal Year Annual Research Report
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19K24293
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| Research Institution | Waseda University |
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Principal Investigator |
及川 哲志 早稲田大学, スポーツ科学学術院, 助教 (20844997)
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| Project Period (FY) |
2019-08-30 – 2021-03-31
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| Keywords | マイクロRNA / RNA代謝 / 骨格筋 / ノンコーディングRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は小分子ノンコーディングRNAであるマイクロRNA（miRNA）の生合成に必須とされる酵素Dicerを薬剤誘導性に筋で欠損したマウスを作出したが，驚くべきことにこのマウスでは，DicerのmRNA発現が95%以上低下したにも関わらずmiRNAの発現低下は最大でも60％ほどであった．このことから，骨格筋に発現するmiRNAは高い安定性を有する可能性が示された．そこで本研究では，ウリジンアナログを用いたin vivo pulse-chase実験と薬剤誘導性miRNA欠損マウスを用いて，骨格筋miRNAの代謝動態を明らかにすることを目的とした．ウリジンアナログである5-ethynyl uridine（5-EU）（5 mg）をWTマウスの腹腔内へ投与し，6時間後から78時間後まで骨格筋を採取した．5-EUにより標識されたRNAを抽出しPCRによるmiRNA発現解析を行なった結果，筋に豊富に発現するmiRNAはすべて72時間以内に代謝されたことが明らかとなった．骨格筋で特に安定したmiRNAであると考えられたmiR-23aの代謝動態を明らかにするため，薬剤誘導性miR-23 cluster欠損マウスを作出した．このマウスにタモキシフェンを投与すると，骨格筋miR-23aの発現は急速に減少した．以上の結果から，生体骨格筋のmiRNAの安定性は我々が期待したよりも低く，筋に豊富に発現するmiRNAの半減期は10時間から30時間ほどであることが示された．
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