2009 Fiscal Year Annual Research Report
脊椎動物の肺の獲得プロセスに関する進化発生学的研究
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20017024
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
岡部 正隆 Jikei University School of Medicine, 医学部, 教授 (10300716)
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| Keywords | ポリプテルス / ゲノム / EST解析 / 進化 / 発生 / 肺 |
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| Research Abstract |
ポリプテルスの咽頭嚢形成期の遺伝子発現パターンの解析を行った。方法は、whole mount in situ hybridization法を用いて各Tbx遺伝子群、Fgf遺伝子群の発現パターンを可視化することと、胚発生期における詳細な咽頭嚢の形成過程を明らかにする目的で、発生ステージ毎に胚のパラフィン連続切片を作製し、ヘマトキシリン・エオシン染色を行い、組織の形成過程を観察し、先の遺伝子の発現パターンを組織レベルで明らかにした。
さらに、ポリプテルスのゲノムBACライブラリーの構築と咽頭胚のEST解析を行った。
支援班と協力してポリプテルスのゲノムライブラリーの作成を試みた。雄のポリプテルス成体から有核赤血球を採取にこれからゲノムDNAを抽出し、BACライブラリーの構築を行った。原因が特定できていないが、数回の試みを行ってもライブラリー構築に都合のよいサイズのゲノム断片を得ることができず、現在のところBACライブラリーの完成には至っておらず、現在も構築を試みている。一方でフィスミドを用いたゲノムライブラリーの構築には成功している。一方、ポリプテルスの神経胚以降孵化直後までの胚を用いてEST解析を行った。約5万のクローンのシーケンシングを両方向から行い約10万リードのシークエンスを得た。クラスター解析の結果、約1万3000遺伝子のシークエンスを得たと推測される。現在ホモロジー検索を行い、各種遺伝子ファミリー毎に得られた遺伝子を整理し、遺伝子情報公開の準備をしている。
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