2011 Fiscal Year Annual Research Report
ＲＡＴ－Ｕ１３ｓｎｏＲＮＡ複合体構造解析によるリボソーム成熟機構の解明
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20247007
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
田中 勲 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 特任教授 (70093052)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
姚 閔 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 教授 (40311518)
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| Keywords | X線結晶構造解析 / RNA-タンパク質相互作用 / snoRNA / リボソーム生合成 / アセチル化 |
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| Research Abstract |
リボソームは翻訳の基幹装置であり，その生合成機構の解明は，生命現象解明の中心的課題である．本研究では，rRNAの成熟過程を，アセチル基転移酵素とガイドsnoRNAの複合体解析を通して解明することを研究目的としている．鈴木勉（東大・院工）は，最近，真核生物においてrRNAのHelix45のアセチル化に関与する必須遺伝子を同定したが，この遺伝子は，我々が構造解析したtRNAアセチル基転移酵素TmcAのホモログをコードしている．我々はこれらの事実から，このTmcAホモログは備え持つヘリケースドメインによりHelix45の2次構造を解きつつ，U13をガイドとしてpre-18SrRNAに結合し，アセチル化を施しているという新しい概念を持つに至った．本申請では，このTmcAホモログ（RAT：RNA AcetylTransferase）を研究対象とした．結晶化のために，マウス由来RAT（mRAT）に加え，S.cerevisiaeなど7種の生物種を新たなターゲットとし，さらに，それぞれのRATのC末端disorder領域をtruncateした変異体も作成した．その結果，C末端123残基を削ったS.cerevisiae由来RAT（ΔC123-yRAT）が最も高純度かつ収量よく調製できることが明らかになった．高純度に調製したΔC123-yRATを用いて約3000条件の結晶化スクリーニングを行い，得られた結晶を用いて大型放射光施設SPring-8 BL32XUにおいてX線回折実験を行った．その結果，最大分解能9Åで回折を得ることに成功した．さらに，位相決定のためのSe-Met置換体ΔC123-yRATの調製及び，結晶化も行った．
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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