2010 Fiscal Year Annual Research Report
突然変異誘発に関与する複製後修復経路の分子機構の解明に向けた生化学的基盤の確立
Project/Area Number |
20310030
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
増田 雄司 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (30273866)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神谷 研二 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (60116564)
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Keywords | 複製後修復 / 損傷乗り越えDNA合成 / 突然変異誘発 / ユビキチン / PCNA / SHPRH / HLTF |
Research Abstract |
放射線や環境変異原によって生じたDNA損傷の多くはDNA複製を阻害する。DNA複製の停止は細胞にとって致死的であるが、この阻害されたDNA複製を再開する分子機構、複製後修復(PRR)が働くことにより細胞死は回避される。本研究の目的は、このPRRの生化学反応を試験管内で再構成し、その分子機構を解析することにある。 損傷乗り越えDNA合成(TLS)経路の解析 本研究では、1)RAD6-RAD18によるPCNAのモノユビキチン化反応と、2)複製型のDNAポリメラーゼ(Polδ)が、損傷乗り越え型のDNAポリメラーゼ(Polη)と交換する反応、を試験管内で再構成することに成功した(初年度)。昨年度は、Polι,PolκとREVIがこの反応系に影響を及ぼすことを明らかにした。本年度は、複製型のDNAポリメラーゼとREV1の交換反応を解析した。 Template switch (TS)経路の解析 TS経路では、停止したプライマー末端が新生娘鎖とアニーリングし、損傷のない鋳型を使ったDNA合成を行うことによりDNA合成を再開する。この反応は、SHPRHまたはHLTFタンパク質によるPCNAのポリユビキチン化により制御されると考えられる。本研究では、PCNAのポリユビキチン化に始まる一連の生化学的反応を再構成し、TS経路の生化学的実体の解析を目指している。昨年度は、PCNAをポリユビキチン化するユビキチンE3リガーゼのひとつ、HLTFの精製法を確立し、HLTFが実際にPCNAをポリユビキチン化する活性を持つことを証明した。本年度は、この反応機構を分子レベルで解析した。
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Research Products
(11 results)
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[Journal Article] Regulation of DNA Polymerase POLD4 Influences Genomic, Instability in Lung Cancer.2010
Author(s)
Huang QM, Tomida S, Masuda Y, Arima C, Cao K, Kasahara T, Osada H, Yatabe Y, Akashi T, Kamiya K, Takahashi T, Suzuki M
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Journal Title
Cancer Research
Volume: 70
Pages: 8407-8411
Peer Reviewed
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