2010 Fiscal Year Annual Research Report
エピジェネティックスと神経細胞移動に注目したビスフェノールA胎生期曝露の影響解析
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20310036
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
伏木 信次 京都府立医科大学, 医学研究科, 教授 (80150572)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊東 恭子 京都府立医科大学, 医学研究科, 准教授 (80243301)
矢追 毅 京都府立医科大学, 医学研究科, 助教 (40311914)
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| Keywords | ビスフェノールA / DNAメチル化 / 大脳 / 肝 / マウス胎仔 |
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| Research Abstract |
プラスチック素材として環境中に存在しヒトへの曝露が広く指摘されるビスフェノールAが脳形成過程にどのようなメカニズムで影響を及ぼすかを明らかにするために、低用量ビスフェノールAを母マウスに投与する実験系を作成した。本年度は胎仔脳におけるエピジェネティックス解析に主眼を置いた。マウス胎仔を胎齢12.5、14.5、16.5日で取り出し、大脳皮質を切り出し凍結、そののちDNAを抽出した。抽出したDNAに対して、メチル化を網羅的に解析する手法であるRLGS(Restriction Landmark Genomic Scanning)法を実施、その際メチル化感受性酵素としてはNotIを用いた。同時にBPA非投与群胎児からもDNAを抽出し、RLGS法を適用し、BPA投与群と非投与群のプロファイルを比較した。両群間でスポット強度の変化を示したスポットからクローニングを行うことにより、DNAメチル化に変化をきたした遺伝子を同定した。同定した遺伝子に関しては、遺伝子内のどの領域でメチル化の変化をきたしているかを解析した。また組織特異的メチル化を調べるために同時に取り出した胎児肝を用いてRLGSによる解析を実施し、脳で見出されたスポットとの比較を行った。BPA投与によってDNAメチル化の変動を示した遺伝子の発現がBPA投与によって亢進あるいは低下しているかどうかをBPA曝露群の胎生期大脳皮質と非曝露群大脳皮質より抽出したmRNAを対象とする定量RT-PCR法によって調べた。その結果、ビスフェノールA曝露によって変動するスポットは脳、肝ともにほぼ同数であったが、遺伝子は異なった。また、脳、肝ともに低メチル化、高メチル化をきたすものがほぼ同数であった。しかも両臓器において、発生段階特異的な遺伝子を高率に標的とする可能性が示された。
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