2009 Fiscal Year Annual Research Report
含塩素有機リン酸トリエステル類の微生物分解に必須な新規分解酵素とその遺伝子の解明
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20310039
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| Research Institution | Nagaoka University of Technology |
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Principal Investigator |
解良 芳夫 Nagaoka University of Technology, 工学部, 教授 (00137168)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 祥司 長岡技術科学大学, 工学部, 准教授 (90324011)
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| Keywords | 難分解性有害物 / 含塩素有機リン酸トリエステル類 / 微生物分解 / 新規分解酵素 / トリエステラーゼ / 遺伝子 / クローニング |
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| Research Abstract |
Tris(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate(以下TDCPP)やTris(2-chloroethyl)phosphate(以下TCEP)などの塩素を含む有機リン酸トリエステル類は、難分解性で蓄積性があり、種々の毒性を有する。我々が世界で初めて単離に成功した含塩素有機リン酸トリエステル類の分解菌Sphingomonas sp.TDK1とSphingobium sp.TCM1に存在する新規分解酵素を単離・精製し、その特徴を明らかにするとともに当該酵素遺伝子を取得し、解析を行うことが本研究の目的である。
平成21年度は以下の研究実績をあげた。
Sphingomonas sp.TDK1株のTDCPP初発分解酵素であるホスホトリエステラーゼ遺伝子のクローニングを行った。TDK1株より精製したホスホトリエステラーゼをリジルエンドペプチダーゼで消化後、得られたペプチド断片のアミノ酸配列を解析した。このアミノ酸配列から設計した縮重プライマーを用いたPCRにより部分遺伝子断片を取得した後、インバースPCR法で遺伝子全長の塩基配列を決定した。
更に、Sphingobium sp.TCM1株のTCEP初発分解酵素であるホスホトリエステラーゼの遺伝子のクローニングも行い、遺伝子全長の塩基配列を決定した。
TDK1株およびTCM1株のホスホトリエステラーゼの遺伝子は極めて高い相同性を示した。しかし、両酵素遺伝子はこれまでよく研究されている、P.diminutaやFlavobacteriumのホスホトリエステラーゼとは相同性を示さず、Burkholderia sp.strain NF100のフェニトロチオン加水分解酵素と低い相同性を示した。
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