新規な機能プロテインチップ技術の確立とその臨床応用

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20310121
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 平野 久 Yokohama City University, 国際総合科学研究科, 教授 (00275075)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 川崎 博史 横浜市立大学, 国際総合科学研究科, 准教授 (70169704) ; 荒川 憲昭 横浜市立大学, 国際総合科学研究科, 助教 (60398394)
• Keywords: 翻訳後修飾 / タンパク質 / プロテインチップ / 質量分析装置 / 癌

Research Abstract

本研究では、新規なプロテインチップを用いて生体中の翻訳後修飾されたタンパク質、特にグリコシル化及びリン酸化されたタンパク質を検出、同定する方法を確立する。また、卵巣癌、前立腺癌、良性腫瘍の組織、培養細胞、血漿中の翻訳後修飾されたタンパク質をハイスループットで検出、同定し、確立された方法が疾患に伴う翻訳後修飾の変動を効率的かつ効果的に解析できるかどうかを検証する。本年度までに、テフロン、ナイロン、ポリビニリデンジフルオリド(PVDF)膜など24種類の膜フィルターについて、電気泳動ゲルからのタンパク質を固定化できるのか、固定化されたタンパク質を、膜フィルター上でプロテアーゼ消化した後、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析装置(MALDI-TOF MS)で効率的に同定できるのかどうかを調べた。その結果、新規なPVDF-MS膜(仮称)がブロッティングと質量分析装置の両方に使用できることを見いだした。そこで、本年度は、二次元電気泳動で分離された様々な特徴を持つ19種類の既知のタンパク質、すなわち、高分子量及び低分子量タンパク質、高等電点及び低等電点タンパク質、分子量が異なるごく微量タンパク質などをPVDF-MS膜に転写し、トリプシンで消化した後、MALDI-TOF MSを用いたペプチドマスフィンガープリンティングによって同定を試みた。その結果、二次元電気泳動で分離され、PVDF-MS膜に転写された19種類のタンパク質については、その分子量、等電点、濃度に拘わらず、うまく同定できることがわかった。

Research Products

• [Journal Article] Proteomic analysis of membrane proteins expressed specifically in pluripoten stem cells (2009)
  • Author(s): Itoh, A., Kurisaki, A., Yamanaka, Y., Hirano, H., Fukuda, H., Sugino, H., Asashima, M
  • Journal Title: Proteomics 9 Pages: 126-137
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mutagenesis of longer inserts by the ligation of two PCR fragments amplified with a mutation primer (2009)
  • Author(s): Kato, Y., Arakawa, N., Mashuishi, Y., Kawasaki, H., Hirano H.
  • Journal Title: J. Biosci. Bioeng. 107 Pages: 95-97
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A signaling polypeptide derived from an innate immune adaptor molecule can be harnessed as a new class of vaccine adjuvant. (2009)
  • Author(s): Kobiyama, K, . Takeshita, F., Ishii, K. J., Koyama, S., Aoshi, T., Akira, S., Sakaue-Sawano, A., Miyawaki, A., Yamanaka, Y., Hirano, H., Suzuki, K., Okuda, K.
  • Journal Title: J Immunol. 182 Pages: 1593-1601
  • Peer Reviewed
• [Presentation] プロテオーム解析による食品安全性評価 (2009)
  • Author(s): 平野 久, 倉田 洋一, Islam, N., 森司
  • Organizer: 日本農芸化学会講演会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 2009-03-28
• [Presentation] 卵巣明細胞腺癌特異的なアネキシンIV遺伝子の発現に関わる転写製御因子の同定 (2008)
  • Author(s): 増石有佑, 荒川憲昭, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] 卵巣明細胞腺癌におけるリン脂質結合タンパク質アネキシンIVの性状解析 (2008)
  • Author(s): 田矢史織, 荒川憲昭, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] レドックスプロテオミスによる血管型NADPHオキシダーゼの標的タンパク質の探索 (2008)
  • Author(s): 野村文子, 荒川憲昭, 山中結子, 勝山真人, 川崎博史, 平野久
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] 川崎病のプロテオーム解析 (2008)
  • Author(s): 志村 直樹, 川崎 博史, 成戸 卓也, 今川 智之, 森 雅亮, 横田 俊平, 平野 久
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] シロイヌナズナカルス再分化におけるタンパク質リン酸化の変動 (2008)
  • Author(s): 風巻 玲子, 中村 浩規, 山中 結子, 平山 隆志, 平野 久
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-10
• [Presentation] Proteomics for CO- and post-translational modifications of the yeast 26S proteasome (2008)
  • Author(s): Hirano, H.
  • Organizer: Taiwan-Japan Proteomics Symposium
  • Place of Presentation: 台北
  • Year and Date: 2008-12-04
• [Presentation] ゲノムからプロテオームヘ (2008)
  • Author(s): 平野 久, 荒川憲昭, 増石有佑, 田矢志織, 山中結子, 宮城悦子, 平原史樹
  • Organizer: 第98回総会日本病理学会
  • Place of Presentation: 松山
  • Year and Date: 2008-11-20
• [Presentation] 中央アジア在来品種コムギにおける高分子量グルテニンサブユニットの変異 (2008)
  • Author(s): 寺沢 洋平, 高田 兼則, 河原 太八, 加藤 鎌司, 平野 久, 笹隈 哲夫, 笹沼 恒男
  • Organizer: 日本育種学会第114回講演会
  • Place of Presentation: 大津
  • Year and Date: 2008-10-12
• [Presentation] Protein identification and quantification using a proteome database of liquid chromatography-mass spectrometric data (2008)
  • Author(s): Kawasaki, H., Arakawa, N., Hirano, H.
  • Organizer: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2008-08-27
• [Presentation] New potential therapeutic targets for ovarian clear cell carcinoma (2008)
  • Author(s): Arakawa, N., Masuishi, Y., Yamanaka, Y., Kawasaki, H., Miyagi, E., Hirahara, F., Hirano, H.
  • Organizer: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2008-08-27
• [Presentation] Nα-terminal acetylation of ribosomal proteins of Saccharomyces cerevisiae and its function (2008)
  • Author(s): Kamita, M., Kamp, R. M., Hirano, H.
  • Organizer: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2008-08-27
• [Presentation] Proteomic analysis of serum from diabetic LEA/Sendai rats (2008)
  • Author(s): Takahashi, E., Okamura, T., Ikari, K., Hirano, H., Yasuda, K., Kaburagi, K.
  • Organizer: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2008-08-27
• [Presentation] GH transgenic salmon proteomics (2008)
  • Author(s): Kurata, Y., Mori, T., Yamanaka, Y., Hirano, H.
  • Organizer: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2008-08-27
• [Presentation] Identification and validation of ovarian cancer-associated proteins (2008)
  • Author(s): Hirano, H., Arakawa, N., kawasaki, H., Masuishi, Y, Takahashi, E., Yahagi, S., Yamanaka, Y.,Miyagi, E., Hirahara
  • Organizer: The joint 2nd Pacific Rim International Conference on Protein Science and 4th Asian-Oceania Human Proteome Organization
  • Place of Presentation: ケアンズ
  • Year and Date: 2008-06-25
• [Presentation] プロテオーム研究の動向 (2008)
  • Author(s): 平野 久
  • Organizer: 第8回日本蛋白質科学会年会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-06-11
• [Presentation] Bud32p複合体は出芽酵母二倍体において出芽マーカーの局在決定に関与している (2008)
  • Author(s): 加藤 悠, 川崎 博史, 平野 久
  • Organizer: 第8回日本蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-06-10
• [Presentation] Proteomic analysis for identification of therapeutic targets of ovarian clear cell carcinoma (2008)
  • Author(s): Arakawa, N., Masuishi, Y., Kawasaki, H., Miyagi, E., Hirahara, F., Hirano, H.
  • Organizer: The joint 2nd Pacific Rim International Conference on Protein Science and 4th Asian-Oceania Human Proteome Organization
  • Place of Presentation: ケアンズ
  • Year and Date: 2008-06-03
• [Presentation] LEA/Sendaiラット血清のプロテオーム解析 (2008)
  • Author(s): 高橋 枝里, 岡村 匡史, 井狩 高平, 平野 久, 安田 和基, 鏑木 康志
  • Organizer: 第51回日本糖尿病学会年次学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-05-23
• [Presentation] Proteomic approach to discover biomarkers and therapeutic targets. (2008)
  • Author(s): Hirano, H.
  • Organizer: The 13th Joint Biophysics Conference
  • Place of Presentation: 南投(台湾)
  • Year and Date: 2008-05-21
• [Book] やさしい原理からはいるタンパク質化学実験法 (2009)
  • Author(s): 平野 久
  • Publisher: 化学同人, 京都(印刷中)
• [Book] タンパク質の事典 (2008)
  • Author(s): 平野 久
  • Total Pages: 621-627
  • Publisher: 朝倉書店, 東京