2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20310138
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
藤井 郁雄 Osaka Prefecture University, 理学系研究科, 教授 (70189984)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
円谷 健 大阪府立大学, 理学系研究科, 准教授 (00372855)
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| Keywords | 抗体酵素 / 遷移状態アナログ / 抗原 / モノクローナル抗体 / ハイブリドーマ / 免疫 / 進化分子工学 / ライブラリー |
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| Research Abstract |
化学反応の遷移状態を模倣した安定な化合物「遷移状態アナログ」をハプテンとして免疫すると,天然酵素と同様な触媒活性をもつ抗体が得られる.本研究では,これまで我々が行ってきた抗体酵素に関する研究を発展させ,試験管内進化による抗体酵素の高機能化を行う。また,進化型ハプテンの免疫より得られたホロ酵素型抗体酵素の新しい機能を開拓する。
I) 抗体酵素(Catalytic Antibody)の試験管内進化
最近,酸化反応を触媒する抗体の作製に,世界で初めて成功した。そこで,本抗体を進化分子工学的に研究し,高活性化を行う。
I-a) 抗体酵素の酵母表層ディスプレイ: 酵母Aga2 subtypeのC末端に,抗体scFvフラグメントを融合させ,酵母表層に提示させた。
I-b) 酵母表層ディスプレイ・ライブラリーの構築: error-prone PCRにより抗原結合部位にランダム変異を導入し,変異体の酵母表層抗体ライブラリーを作製した。
II. ポロ酵素型抗体酵素の新機能開拓
最近,従来の遷移状態アナログとは全く異なる進化型ハプテンを設計し,「ホロ酵素型抗体酵素」の作製に成功した。ホロ酵素型抗体酵素は,活性部位に低分子有機化合物の人工補酵素をもち,それを触媒基として化学反応を触媒する。
II-a) ホロ酵素型抗体酵素によるアシル転移反応: アルコール型ミン型補酵素を導入することによって,アシル転移反応を触媒することが判明した。
II-b) ホロ酵素型抗体酵素によるアルドール反応:アミン型補酵素を導入することによってアルドール反応を触媒することに成功した。
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