2010 Fiscal Year Annual Research Report
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20350077
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
藤井 紀子 京都大学, 原子炉実験所, 教授 (90199290)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森本 幸生 京都大学, 原子炉実験所, 教授 (80200450)
杉山 正明 京都大学, 原子炉実験所, 准教授 (10253395)
木野内 忠稔 京都大学, 原子炉実験所, 講師 (90301457)
齊藤 毅 京都大学, 原子炉実験所, 助教 (10274143)
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| Keywords | 蛋白質の異常凝集 / 白内障 / 老化 / ラセミ化 / 紫外線 / 加齢性疾患 / D-アミノ酸 / 皮膚の光老化 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は「蛋白質の異常凝集化はアミノ酸のD-体化が引き金である」という仮説を証明し蛋白質の異常凝集をD-Aspを分子指標として統一的に理解することである。平成22年度は下記の項目について研究を行った。
1)水晶体の主要蛋白質であるαA-,αB-クリスタリン(Cry)の異常凝集過程の解析
ヒトリコンビナントのαA-,αB-Cryに紫外線照射し、X線小角散乱実験、中性子散乱実験を行った。その結果、αB-Cryのみが異常凝集化し、αA-Cryに変化がなかった。水晶体中では紫外線照射によってαB-Cryがダメージを受けてもαA-Cryが構造や機能を保持し、紫外線ストレスに対応可能であることを示していると考えられた。
2)水晶体以外の眼組織におけるD-β-Asp含有蛋白質の検出
我々が開発したD-β-Asp含有蛋白質抗体を用いて免疫組織染色により網膜、結膜、角膜の不溶性凝集物にD-β-Asp含有蛋白質を見出した。現在これらの蛋白質を同定中である。
3)加齢や紫外線照射によって生じる皮膚のD-β-Asp蛋白質中の同定
我々は以前の研究で皮膚蛋白質中におけるD-β-Asp残基の増加は紫外線のストレスと関連が強いことを示した。22年度はマウスの皮膚に紫外線照射を行い、Asp残基のD-β-化が進んだ組織から蛋白質を抽出し、2次元電気泳動、D-β-Asp含有蛋白質抗体によるウエスタンブロッテイングを行い、その陽性スポットの蛋白質についてゲル内酵素処理、断片ペプチドの質量分析を行い、これらの蛋白質は表皮のケラチンである事が判明した。
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