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2009 Fiscal Year Annual Research Report

化学法と発現法を組み合わせたヒト型糖鎖を有する天然糖タンパク質の精密合成

Research Project

Project/Area Number 20350081
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

梶原 康宏  Osaka University, 大学院・理学研究科, 教授 (50275020)

Keywords糖タンパク質 / ベブチド / 糖鎖
Research Abstract

21年度は、サイトカイン類(天然型エリスロポエチン:EPO)とIgG-Fcの合成の検討を20年度に引き続き行った。EPOの合成研究においては、新規なペプチドチオエステル法を確立することができた。すなわち、ペプチド鎖のC末端にCys-Gly配列を含む糖ペプチドチオエステル(Pepetide-X-Cys-Gly : Xは標的ペプチドのC末端のアミノ酸)を固相合成により調製後、Cysのチオール基を炭酸エステル化し、そしてグアニジン処理することでCys-Gly配列の脱離を伴ってPepetide-X-グアニジン誘導体を得ることができた。続いてこの誘導体をアルキルチオールで処理することで目的とするPepetide-X-SRを得ることに成功した。また、この方法を用いて、ヒト複合型糖鎖をもつEPOの糖ペプチドチオエステルセグメントを合成することにも成功した。22年度は、この方法を利用して天然型のEPOの合成を引き続き検討する。IgG-Fcの合成は、ホモダイマーであるので、一方のフラグメントを作り2量化し、抗体のアフィニティーカラムProtein-A等で精製できるものを単離するという趣旨で合成の検討をおこなった。Fc部位は、重鎖の229-444番目が相当し、複合型糖鎖は、その297番についている。そこで、HisTag-メチオニンをN末端にもつCys321から444ペプチドセグメントを大腸菌発現で調製し、そしてHIsTagカラム、CNBr処理をすることにより、Cys321から444ペプチドセグメントを得た。また、アシアロ糖鎖を297位にもつ糖ペプチドチオエステル(Cys293-Lys320)を固相合成により調製し、大腸菌で発現した長鎖ペプチドとライゲーションすることで293-444の糖ペプチド鎖を得ることに成功した。229から292位のペプチド鎖は、2つのセグメントにわけて調製し、そして293-444までの糖ペプチド鎖とライゲーションを行い全長を得た。しかし、この方法では、必要量のタンパク質を得るには問題があったので、22年度は、21年度に新規に開発したペプチドチオエステル法を利用して検討する予定である。

  • Research Products

    (10 results)

All 2010 2009

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] Synthesis of glycosylated polypeptide chain of inducible costimulatior on T cell2010

    • Author(s)
      Takefumi Murase, Yasuhiro Kajihara
    • Journal Title

      Carbohydrate Research (In Press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Synthesis of heavily glycosylated peptide alpha-thioester2010

    • Author(s)
      Kiriko Hirano, Yasuhiro Kajihara
    • Journal Title

      Journal of Carbohydrate Chemistry (In Press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Definitive evidence that a single N-glycan among three glycans on inducible costimulator is required for proper protein trafficking and ligand binding2010

    • Author(s)
      N.Kamei, R.Fukui, Y.Suzuki, Y.Kajihara, M.Kinoshita, K.Kakehi, H.Hojo, K.Tezuka, T.Tsuji
    • Journal Title

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 391

      Pages: 557-563

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Design and Synthesis of Homogeneous Erythropoietin Analogue with Two Human Complex-Type Sialyloligosaccharides2009

    • Author(s)
      K.Hirano, D.Macmillan, K.Tezuka, T.Tsuji, Y.Kajihara
    • Journal Title

      Angew.Chem.Int.Ed., 48

      Pages: 9557-9560

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Efficient Substitution Reaction from Cysteine to the Serine Residue of Glycosylated polypeptide : Repetitive Peptide Segment Ligation Strategy and the Synthesis of Glycosylated Tetracontapeptide Having Acid Labile Sialyl-T_N Antigens.2009

    • Author(s)
      R.Okamoto, S.Souma, Y.Kajihara
    • Journal Title

      J.Org.Chem. 74

      Pages: 2494-2501

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Efficient and Systematic Systematic Synthesis of A Small Glycoconijugate Library Having Human Complex Type Oligosaccharides.2009

    • Author(s)
      T.Murase, T.Tsuji, Y.Kajihara
    • Journal Title

      Carbohydr.Res. 344

      Pages: 762-770

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Synthesis of Homogeneous Glycoproteins Having Complex Complex Type Oligosaccharides2009

    • Author(s)
      Y.Kajihara
    • Organizer
      Asian Communication of Glycobiology and Glycotechnolgy
    • Place of Presentation
      産業技術総合研究所(つくば・茨城)
    • Year and Date
      2009-10-29
  • [Presentation] Synthesis of Homogeneous Glycoproteins Having Complex Complex Type Oligosaccharides2009

    • Author(s)
      Y.Kajihara
    • Organizer
      Modern Solid Phase Peptide Synthesis and Its Application
    • Place of Presentation
      Gold Coast, Australia
    • Year and Date
      2009-10-10
  • [Presentation] 精密有機合成法と生化学的なアプローチによる共刺激糖タンパク質AILIM/ICOSの糖鎖機能の解明研究2009

    • Author(s)
      梶原康宏、田辺康孝、吉原章子、亀井直樹, 木下充弘、掛樋一晃、手塚克成、辻孝
    • Organizer
      第29回日本糖質学会
    • Place of Presentation
      飛騨世界生活文化センター(岐阜)
    • Year and Date
      2009-09-09
  • [Presentation] Evaluation of oligosaccharide effects by use of chemical synthesis of homogeneous glycoproteins having complex type oligosaccharides2009

    • Author(s)
      Y.Kajihara, Y.Tanabe, S.Sasaoka, K.Hirano, R.Okamoto, K.Tezuka, T.Tsuji
    • Organizer
      15th European Carbohydrate symposium
    • Place of Presentation
      Vienna, Austria
    • Year and Date
      2009-07-21

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Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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