2009 Fiscal Year Annual Research Report
スプライソソーム非依存型スプライシングの構造的基盤
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20370038
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
児嶋 長次郎 Nara Institute of Science and Technology, バイオサイエンス研究科, 准教授 (50333563)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
箱嶋 敏雄 奈良先端科学技術大学院大学, 情報科学研究科, 教授 (00164773)
大木 出 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教 (80418574)
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| Keywords | 構造生物学 / NMR / RNA / タンパク質 / 分子認識 |
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| Research Abstract |
本研究では小胞体ストレス応答におけるIRE1経路で見いだされた、スプライソソーム非依存型スプライシング機構の構造的基盤の解明を目指している。具体的には酵母IrelpのRNaseドメイン、基質mRNA、およびこれらの複合体の構造解析を行い、配列特異的なmRNA切断機構を明らかにすること、またRNaseドメインを含むC末端ドメイン全長の立体構造情報にもとづき、RNaseドメインを含むC末端ドメイン全長が持つmRNA切断活性の調節機構を解明することを目指している。
酵母Irelp RNaseドメインの構造解析:平成20年度に引続きNMRおよびCDなどからRNaseドメインの構造情報を得た。また、NMR測定のための13C 15N安定同位体標識を行い、NMR信号の帰属のための各種測定と立体構造決定のためのNOESYの測定を行い、信号帰属と構造解析を進めた。ピークの重なりやマイナーピークの存在によって帰属は困難を極めたが、選択標識により主鎖帰属を完了することが出来た。
HAC1 mRNA切断部位を含むステムループRNAの構造解析:Irelpが認識するRNA配列に配列特異的な立体構造があるかどうかを明らかにするために、平成20年度に引続きHAC1 mRNAの2つのステムループのNMR構造解析に取り組んだ。化学合成法と酵素法を用いて13C 15N安定同位体標識を行い、NMR信号の帰属のための各種測定と立体構造決定のためのNOESYの測定を行った。また化学合成法において新規安定同位体標識技術を開発した。
変異体を用いたmRNA認識機構の解明:HAC1 mRNAを用いてNMR滴定実験を行い、HAC1 mRNAの認識に関与するRNaseドメインのアミノ酸残基を同定した。
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