2008 Fiscal Year Annual Research Report
耐凍剤チャンネル発現の誘導による卵子・胚の万能凍結保存法の開発
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20380155
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
枝重 圭祐 Kochi University, 教育研究部自然科学系, 准教授 (30175228)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
葛西 孫三郎 高知大学, 教育研究部自然科学系, 教授 (60152617)
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| Keywords | 卵子 / 受精卵 / 促進拡散 / 水透過性 / 耐凍剤透過性 / アクアポリン |
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| Research Abstract |
本研究では、マウスの卵子と胚を同じ方法でガラス化凍結保存できる、万能凍結保存法の開発を目指す。本年度は、細胞膜透過性が低く耐凍性も低い卵子と、細胞膜透過性が比較的低い4細胞期胚における内在性の水・耐凍剤チャンネルの発現を誘導する方法を開発し、さらに誘導可能な水・耐凍剤チャンネルの透過特性を明らかにすることを目指した。卵核胞期卵子を、デキサメサゾン(DEX)を添加した培養液中で成熟させても、水・耐凍剤透過性は向上せず、水・耐凍剤チャンネルは誘導されなかった。比較的高濃度のレチノイン酸(RA)を添加した培養液で培養した場合は、MII期にまで成熟しなかったが、水透過性とアセトアミド(AA)透過性が約1.5倍向上し、水・耐凍剤チャンネルが誘導されたと考えられた。ソルビトールを添加した高張な培養液(高張液)で培養した場合も、卵子はMII期にまで成熟しなかったが、AA透過性が約4倍に増加した。卵子における水・耐凍剤チャンネルであるアクアポリン(AQP)のmRNAの発現をRT-PCRで調べた。その結果、AQP3とAQP7の他にAQP9の発現が認められた。一方、マウス1細胞期胚をDEXあるいはRAを添加した培養液や高張液中で4細胞期胚にまで発育させたが、水・耐凍剤透過性は向上せず、水・耐凍剤チャンネルの発現は誘導されなかった。次に、マウスのAQP3とAQP9のcRNAを卵核胞期の卵子に注入してこれらのAQPをMII期で発現させて、その透過特性を調べた。AQP3は水、グリセロール、エチレングリコールを効率よく透過したが、AA、DMSO、プロピレングリコールはほとんど透過しなかった。一方、AQP9は、水はほとんど透過しなかったが、いずれの耐凍剤も効率よく透過した。したがって、マウス卵子ではRAと高張液によって、AQP3とAQP9のいずれもが誘導されたと考えられる。
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[Presentation] Exogenous expression of rat aquaporin-3 enhances permeability to water and cryoprotectants of immature oocytes in the zebrafish (Danio rerio).2008
Author(s)
Shinsuke Seki, Bo Jin, Tsuchiya Ryouma, Toshimitsu Kouya, Takao Hara, Delgado M. Valdez Jr., Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
The 5th Annual Conference of the Asia Reproductive Biotechnology Society
Place of Presentation
Horizon Hotel, Kunming, Yunnan Province, China
Year and Date
20081127-20081201
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[Presentation] ウシ桑実胚の水透過と耐凍剤透過におけるaquaporin 3 の役割2008
Author(s)
河合 泰典, 原 隆夫, 松尾 完, Valdez M. Delgado Jr., 金 波, 好村 正博, 東山 龍一, 市川 恭子, 恒石 望太郎, 枝重 圭祐, 葛西 孫三郎
Organizer
第101回日本繁殖生物学会
Place of Presentation
福岡県福岡市九州大学医学部
Year and Date
20080918-20080920
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[Presentation] Short-term storage of vitrified two一cell mouse embryos at-80°C for handy transportation with dry ice.2008
Author(s)
Bo Jin, Eri Hotta, Yukiko Kobayashi, Shinsuke Seki, Masahiro Yoshimura, Hiroshi Honda, Keiji, Mochida, Atsuo Ogura, Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
第101回日本繁殖生物学会
Place of Presentation
福岡県福岡市九州大学医学部
Year and Date
20080918-20080920
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[Presentation] Permeability to water and cryoprotectants of zebrafish (Danio Rerio) oocytes at mid stage III.2008
Author(s)
Delgado M. Valdez, Jr., Ryoma Tsuchiya, Shinsuke Seki, Naoya Saida, Bo Jin, Masahiro Yoshimura, Chihiro Koshimoto, Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
The 45th Annual Meeting of the Society for Cryobiology
Place of Presentation
The Omni Charlotte Hotel, Charlotte, NC, USA
Year and Date
20080720-20080723
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[Presentation] The pathway for the movement of water and cryoprotectantsin bovine oocytes and embryos.2008
Author(s)
Keisuke Edashige, Takao Hara, Yasunori Kawai, Masahiro Yoshimura, Bo Jin, Delgado M. Valdez, Jr., Magosaburo Kasai
Organizer
The 45th Annual Meeting of the Society for Cryobiology
Place of Presentation
The Omni Charlotte Hotel, Charlotte, NC, USA
Year and Date
20080720-20080723
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