多包条虫の網羅的cDNA解析と寄生虫の増殖・分化の分子基盤とワクチン開発

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20380164
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 奥 祐三郎 Hokkaido University, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (60133716)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松本 淳 日本大学, 生物資源科学部, 講師 (70296169) ; 渡辺 純一 東京大学, 医科学研究所, 助教 (20201189) ; 八木 欣平 北海道立衛生研究所, 生物科学部, 衛生動物科長 (70414323)
• Keywords: エキノコックス / 網羅的cDNAライブラリー / RNA干渉 / 発育段階 / テトースパニン / 組み換えワクチン / 糖蛋白 / in silico解析

Research Abstract

我々は多包条虫の幼虫と成虫のcDNAライブラリを作成し、5'ワンパスシークエンスデータからin silico解析を行っている。5種のSpliced leader,様々な主要抗原の幼虫および成虫の発現の偏り、熱ショック蛋白(18種)、ミトコンドリアlarge subunit ribosomal RNA(16S)、成虫特異的に発現するSolute Carrier Familyおよび成虫の様々な蛋白など、その他の遺伝子も含めて多包条虫の発育段階により顕著な差が有ることが示された。
次ぎに、これらの分子の機能を解析するため、前年度に原頭節のRNA干渉の条件設定を行ったAntigenBにつづいて、ターゲットとして幼虫の増殖に関連すると考えられるAntigenII/3,14-3-3に注目し、RNA干渉を試みた。リアルタイムRT-PCRによりmRNAを測定し、AntigenII/3,14-3-3のmRNAは顕著に減少していることを示し、さらに、抗血清用いてこれらのタンパク量においても減少していることを確認した。また、これらのについて多包虫の胚芽細胞を用いたRNAiも行い、成功した。
ワクチン候補としてTetraspanin類(TSP1-12)について解析し、TPS1-7について幼虫に対するワクチン効果を比較し、TSP1と3に効果があり、TSP5は有鉤嚢虫診断用抗原との相同性から今後診断用抗原としての有効性が示唆された。さらに、さまざまなプロテアーゼ(18種)、抗酸化関連遺伝子、アクチン(6種)などについて解析した。現在は成虫および幼虫に特異的な主要診断用抗原である糖蛋白(特にTSES33/38とEm2)に注目し、研究を進めている。

Research Products

• [Journal Article] Echinococcus multilo cularis : two-dimensional Western blotting method for the identification and expression analysis of immunogenic proteins in infected dogs. (2010)
  • Author(s): Kouguchi H, Matsumoto J, Katoh Y, Suzuki T, Oku Y, Yagi K.
  • Journal Title: Exp Parasitol. 124 Pages: 238-243
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Evaluation of Echinococcus multilocularis tetraspanins as vaccine candidates against primary alveolar echinococcosis. (2009)
  • Author(s): Dang Z, Yagi K, Oku Y, Kouguchi H, Kajino K, Watanabe J, Matsumoto J, Nakao R, Wakaguri H, Toyoda A, Sugimoto C.
  • Journal Title: Vaccine. 27 Pages: 7339-7345
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Multiplex PCR system for identifying the carnivore origins of faeces for an epidemiological study on Echinococcus multilocularis in Hokkaido, (2009)
  • Author(s): Nonaka N, Sano T, Inoue T, Teresa Armua M, Fukui D, Katakura K, Oku Y.
  • Journal Title: Parasitol Res. 106 Pages: 75-83
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Molecular cloning and characterization of a T24-like protein in Echinococcus multilocularis. (2009)
  • Author(s): Dang Z, Watanabe J, Kajino K, Oku Y, Matsumoto J, Yagi K, Kouguchi H, Sugimoto C.
  • Journal Title: Mol Biochem Parasitol 168 Pages: 117-119
  • Peer Reviewed
• [Presentation] In silico analyses of full -length rich cDNA libraries of larval and adult Echinococcus multil ocularis(Preliminary results). (2009)
  • Author(s): Oku, Y., Armua -Fernandez M. T., Yagi, et al
  • Organizer: Workshop on"Recent advances in the biology and biochemistry of Echinococcus infections", in the context of the XXIII World Congresss of Hydatidosis.,
  • Place of Presentation: Hotel Raisson, Coloniadel Sacrament o, Uruguay
  • Year and Date: 2009-12-10
• [Presentation] RNA interference(RNAi)methods for protoscoleces and primary cells of Echinococcus multilocularis (2009)
  • Author(s): Mizukami, C., Spiliotis M., Gottstein, B., Katakur a, K., Oku, Y.
  • Organizer: The XXIII World Congresss of Hy datidosis.
  • Place of Presentation: Hotel Raisson, Coloniadel Sacramento, Uruguay
  • Year and Date: 2009-12-10
• [Presentation] DNA dot blot assay for the differentiation of Taeniid cestodes in canids. (2009)
  • Author(s): Armua-Fernandez, M.T., Nonaka, N., Sakurai, T., Go sttstein, B., Deplazes, P., Katakura, K., Oku, Y,
  • Organizer: The XXIII World Congresss of Hydatidosis.
  • Place of Presentation: Hotel Raisson, Coloniadel Sacramento, Uruguay
  • Year and Date: 2009-12-10
• [Presentation] 幼虫および成虫の多包条虫cDNAライブラリーに多く見られたcDNAのin silico解析、特にAntigenBとLSU rRNAについて (2009)
  • Author(s): 奥祐三郎、八木欣平、原雄一郎、渡辺日出海、李爽、山下理宇、若栗浩幸、鈴木穣、豊田敦、渡辺純一
  • Organizer: 第55回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会
  • Place of Presentation: 帯広市 帯広畜産大学
  • Year and Date: 2009-10-03
• [Presentation] Discrimination of taeniid cestodes in canids by using species-specific oligonucleotide probes (2009)
  • Author(s): Armua-Fernandez, M.T., Nonaka, N., Sakurai, T., Katakura, K., Oku, Y.,
  • Organizer: 第55回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会
  • Place of Presentation: 帯広市 帯広畜産大学
  • Year and Date: 2009-10-03
• [Presentation] 多包条虫(幼虫・成虫)のcDNAライブラリーのin silico解析特にSpliced Leaderを有する遺伝子について (2009)
  • Author(s): 奥祐三郎、八木欣平、原雄一郎、渡辺日出海、李爽、山下理宇、若栗浩幸、鈴木穣、豊田敦、渡辺純一
  • Organizer: 第148回日本獣医学会学出集会
  • Place of Presentation: 鳥取市 鳥取市民会館
  • Year and Date: 2009-09-26
• [Presentation] 人と動物の共通感染症:エキノコックス症の問題解決に向けて(特別講演)招待講演 (2009)
  • Author(s): 奥祐三郎
  • Organizer: 第32回 日本骨・関節感染症学会
  • Place of Presentation: 札幌市京王プラザホテル
  • Year and Date: 2009-06-19
• [Remarks] フル エキノコックス
  • URL: http://fullmal.hgc.jp/em/