2009 Fiscal Year Annual Research Report

機能的プロテオミクスと1分子シグナル伝達解析法による血管緊張異常の分子機構の解明

Research Project

Project/Area Number	20390059
Research Institution	Yamaguchi University
Principal Investigator	小林誠 Yamaguchi University, 大学院・医学系研究科, 教授 (80225515)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	岸博子山口大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (40359899) 川道穂津美山口大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (80363042) 加治屋勝子山口大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (00379942)
Keywords	病態生理 / 血管病 / 1分子 / シグナル伝達 / 質量分析
Research Abstract	心筋梗塞や脳卒中などの血管病は合計すると我国死因の2位である。中でも急性発症の血管攣縮のような異常収縮は、突然死の主因である。血管異常収縮の分子機構を解明し、副作用のない分子標的治療薬を開発することが急務である。しかしながら、報告されている血管異常収縮のシグナル伝達経路は、施設によっても、また実験手技や解析法によっても、真逆の結果が出ている場合が少なくなく、混乱を極めている状況にある。よって、未だ異常収縮治療の標的分子さえ、確信をもって同定することができず、従って、標的分子の機構解析、特に病的役割を解明するには程遠いのが現状である。従って、本研究では、従来の不確定な方法論ではなく、より確実な手法を導入して、確定的な実験結果を得る事を目指す。確実な科学的実証としては、『見えるもの』と『物質の存在』である。本研究では、『見えるもの』として、血管異常収縮の各シグナル分子とその相互作用のリアルタイム可視化を目指し、また、『物質の存在』として質量分析による物質とその修飾の同定を試みる。これらの確実な科学的実証方法により、血管異常収縮の分子機構を解明することを試みる。本年度は、以下の研究成果を得た。1)初年度に明らかにした「血管異常収縮の基盤となるカルシウム非依存性収縮において、カルシウム非依存性のミオシンリン酸化反応」について、さらに検討し、リン酸化部位として候補部位を複数個絞り込む事ができた。2)初年度に成功した「カルシウム非依存性にリン酸化されたミオシンとアクチンの1分子動態をリアルタイムに観察すること」をさらに解析を行い、正常収縮と異常収縮の分子動態の比較を行った。3)初年度に開発に成功した「膜ラフトモデル膜における病的シグナル分子相互作用を解析するシステム」を用いて、SPCとモデル膜との相互作用の動力学的解析に成功した。