2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20390126
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
堀口 安彦 Osaka University, 微生物病研究所, 教授 (00183939)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神谷 重樹 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (60379089)
福井 理 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (70397743)
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| Keywords | 百日咳菌 / 秘管支敗血症菌 / IVET / マクロアレイ |
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| Research Abstract |
感染過程において宿主内で特異的に発現する遺伝子群探索を目的として改良型IVET法を開発した。本法は菌体表層に提示される標識蛋白質をコードする遺伝子上流にゲノムライブラリを挿入し感染過程で発現するライブラリ導入菌株のみを選択的に回収し、マイクロアレイを用いた網羅的解析のための材料を提供する。本年度は、培地へのMgSO4添加により気管支敗血症菌の遺伝子発現が変動することを利用して本法の有効性の検討を行った。その結果、MgSO4添加培地で培養したライブラリ導入菌株群からはMg2+イオンによって正に制御される鞭毛遺伝子群が、MgSO4無添加培地で培養したライブラリ導入菌株群からはMg2+イオンによって負に制御される病原性遺伝子斜が、それぞれ選択的に回収されることを確認できた。さらに、既知のプロモーターを導入した菌株とラット感染モデル実験系を用いて本法を行うと、宿主の気管から病原性遺伝子のプロモーターを導入した菌株が選択的に回収されることも確認できた。
本法により、これまで解析が困難であった宿主、組織および感染時間など実際の感染環境の様々な違いに応じて発現する遺伝子群の変化を網羅的に解析することが可能になった。昨年度に構築したカスタムアレイと合わせて、感染動物モデル実験(マウス、モルモット、ラット)において特異的に発現する遺伝子探索のための全ての実験手法および実験条件の検討が終了した。
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Research Products
(4 results)
