2010 Fiscal Year Annual Research Report
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20390205
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
青柳 豊 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00142266)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内海 利男 新潟大学, 自然科学系, 教授 (50143764)
大越 章吾 新潟大学, 医歯学系, 講師 (70231199)
須田 剛士 新潟大学, 医歯学系, 助教 (10361916)
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| Keywords | フコース転移酵素 / 肝細胞癌 / フコシル化AFP / FUT8 / 糖鎖 |
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| Research Abstract |
α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標とされるフコシル化AFP産生に関与しているが、その機序の分子機構は解明されていない。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8遺伝子発現を抑制し基礎的検討を行なった。
【結果】肝癌細胞株にTransientにFUT8 siRNAを48時間導入しFUT8 mRNA発現量をリアルタイムPCRで確認したところ、Control SiRNA導入細胞株に比較し、KYN2細胞株で最大5.9±0.9%にFUT8 mRNA発現が抑制された。しかし、FUT8蛋白機能評価として、LeeChip^<TM>Ver1.0を用いた細胞質の糖鎖プロファイリング解析を行った結果、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。SiRNAによる明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、それに伴う蛋白レベルの発現低下や実際のFUT8酵素活性低下による遺伝子発現・関連蛋白質の解析には更なる遺伝子発現の抑制が必要であると考え、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショナルノックアウトマウスの作製に着手した。現在、FUT8遺伝子にLox配列をもつC57BL/6N-FUT8^<lox(neo)/lox(neo)>マウスを作製済みであり、B6.Cg-Tg (Alb-cre)マウスと交配中である。
【考察】RNAiの手法で、明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。今後、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショチルノックアウトマウスの肝発癌実験を行い、FUT8発現抑制による遺伝子発現および生物学的悪性度の変化を検討し、肝癌悪性度を規定する責任遺伝子群を同定する予定である。
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Research Products
(26 results)
