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2010 Fiscal Year Annual Research Report

糖鎖不全IgAに対する新規受容体の同定と解析によるIgA腎症発症機序の解明

Research Project

Project/Area Number 20390234
Research InstitutionNiigata University

Principal Investigator

成田 一衛  新潟大学, 医歯学系, 教授 (20272817)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 坂爪 実  新潟大学, 医歯学系, 非常勤講師 (70334662)
KeywordsIgA腎症 / 糖鎖不全 / 受容体 / メサンギウム細胞 / クローニング
Research Abstract

本研究の目的は、IgA腎症の病因に直結していると考えられているヒンジ部糖鎖不全IgA1分子が、全身循環血中に存在するにもかかわらず、糸球体メサンギウム細胞に特異的に沈着する機序を明らかにすることである。申請者らは、糖鎖不全IgAに親和性を有する結合性がメサンギウム細胞に発現することを観察し、この新規受容体の同定とその発現調節機構の解析をおこなった。糖鎖不全IgA1プローブは正常血清からIgAを精製し、Neuraminidase処理による脱シアル化とβ-galactosidase処理による脱ガラクトシル化を行い、さらに蛍光標識ラベルしてプローブとした。ヒトメサンギウム細胞は、TGF-β,TNF-α,アンジオテンシンなどで刺激を加えると、糖鎖不全IgA1に対する親和性が亢進した。次に糖鎖不全IgA1に親和性を示すメサンギウム細胞をCell sortingにて濃縮し、決定された至適培養条件下で得られたメサンギウム細胞を、細胞表面をbiotin化した後にNP-40を用いて可溶化し、セファロースビーズに共有結合で結合させた糖鎖不全IgA1とともに反応させ、糖鎖不全IgA1と結合する可溶成分を吸収した。得られたIgAと可溶成分の複合体をSDS-PAGEにて展開し、PVDF膜に転写した後、HPR標識抗biotin抗体を用いて、糖鎖不全IgA1と結合したメサンギウム細胞膜蛋白を同定する。得られた蛋白質のアミノ酸シークエンスを行い、一部のアミノ酸配列を決定した。
この新規受容体の一部は、βインテグリン鎖と一致していた。ヒトIgA腎症の腎生検検体では、α2/β1インテグリンの発現がIgA沈着と一致していた。また、IgA1をcollagen IVと混和すると著しくメサンギウム細胞に対する親和性が上昇した。以上の結果から、糖鎖不全IgA1がcollagen IVと複合体を形成し、α2/β1インテグリンを介してメサンギウム細胞に結合し、その結果細胞増殖刺激を惹起していると考えられた。

  • Research Products

    (5 results)

All 2011 2010

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (1 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Injured kidney cells express SM22alpha(transgelin):Unique features distinct fromalpha-smooth muscle actin(alphaSMA)2011

    • Author(s)
      Sakamaki Y, et al.
    • Journal Title

      Nephrology

      Volume: 16 Pages: 211-218

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Membranoproliferative pattern of glomerular injury associated with complement component g deficiency due to Arg95Stop mutation2011

    • Author(s)
      Miura T, et al.
    • Journal Title

      Clinical and Experimental Nephrology

      Volume: 15 Pages: 86-91

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Clinicopathological characteristics of patients with IgG4related tubulointerstitial nephritis2010

    • Author(s)
      Saeki T, et al.
    • Journal Title

      Kidney International

      Volume: 78 Pages: 1016-1023

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] IgA腎症の病態と治療2010

    • Author(s)
      成田一衛
    • Organizer
      日本内科学会第127回信越地方会
    • Place of Presentation
      松本市 特別講演
    • Year and Date
      2010-11-13
  • [Book] Annual Review腎臓20112011

    • Author(s)
      成田一衛, 他
    • Total Pages
      310
    • Publisher
      中外医学社

URL: 

Published: 2012-07-19  

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