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2008 Fiscal Year Annual Research Report

キャピラリー電気泳動反応器による生体分子間相互作用の総合的定量解析システム

Research Project

Project/Area Number 20550070
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

星野 仁  Tohoku University, 大学院・環境科学研究科, 教授 (20124620)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 高橋 透  東北大学, 大学院・環境科学研究科, 助教 (30361166)
壹岐 伸彦  東北大学, 大学院・環境科学研究科, 准教授 (50282108)
Keywords生体分子間相互作用 / 定量的解析 / 反応速度論 / 平衡論
Research Abstract

本研究計画では, 生体分子コンプレックスの結合能を総合的に定量評価するための新しい方法論を創出するために, 1, 動的アプローチとして, キャピラリー電気泳動反応器(CER)による生体分子コンプレックスの解離反応速度論解析の方法論を確立し, 2, 静的アプローチとして, キャピラリー電気泳動(CE)を用いた生体分子コンプレックスの熱力学的平衡定数の測定法の確立を目指す.
平衡物性や構造, その機および諸物性に関する研究が進んでおり, それらの情報を入手しやすいこと, および, キャピラリー電気泳動への適合性の良さを勘案して, Zinc-finger系をモデル物質系としてその解離反応速度解析を検討した. Zinc-finger proteinを構成するZinc-fingerドメインは亜鉛と結合することによって立体構造が維持される金属タンパク(Zn(II)-Zinc-finger complex : [zfp-Zn(II)]と略)である. ここでは特に, CERによる[zfp-Zn(II)]の解離反応速度論について検討を行ったところ, 予想以上に[zfp-Zn(II)]の解離反応が速く, キャビラリー電気泳動の時間スケールではその解離反応を追跡できないことが分かった. そこで, 逆に[zfp-Zn(II)]の解離反応が速いことを利用して, アフィニティーCEの手法を用いて[zfp-Zn(II)]の熱力学的結合パラメーターである結合定数(K_b)を得ることに成功した.
一方, Zinc-finger protein系以外の生体分子コンプレックス系へのCERの適用を試みたところ, DNA結合タンパクの一種であるsingle-stranded DNA binding protein (SSB)と一本鎖DNA(ssDNA)との複合体[SSB-ssDNA]系の解離反応速度解析に成功し, その解離反応速度定数(k_d)を得ることに成功した.

  • Research Products

    (4 results)

All 2009 2008

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Expanding the Scope of Capillary Electrophoretic Reactor to Single Stranded DNA Binding Protein- Single Stranded DNA Complexes As Exemplified for A Tool for Direct Measurement of Dissociation Kinetics of Biomolecular Complexes2009

    • Author(s)
      Toru Takahashi, Kei-ichirou Ohtsuka, Nobuhiko Iki, and Hitoshi Hoshino
    • Journal Title

      Electrophoresis (印刷中)

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] キャピラリー電気泳動の分離機能を利用する計測システム2009

    • Author(s)
      高橋透
    • Organizer
      第11回機能構造と分析化学シンポジウム
    • Place of Presentation
      東北大青葉山北キャンパス(宮城県仙台市)
    • Year and Date
      2009-03-17
  • [Presentation] キャピラリー電気泳動反応器によるZn(II)-zinc finger複合体の解離反応速度解析2008

    • Author(s)
      山岸璃差, 高橋透, 壹岐伸彦, 星野仁
    • Organizer
      第3回バイオ関連化学合同シンポジウム
    • Place of Presentation
      東工大すずかけ台キャンパス(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2008-09-19
  • [Presentation] キャピラリー電気泳動反応器によるZn(II)-zinc finger複合体の解離反応速度解析2008

    • Author(s)
      山岸璃差, 高橋透, 壹岐伸彦, 星野仁
    • Organizer
      みちのく分析科学シンポジウム2008
    • Place of Presentation
      東北大青葉山キャンパス(宮城県仙台市)
    • Year and Date
      2008-07-19

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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