2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20570210
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| Research Institution | National Research Institute for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
高田 修治 National Research Institute for Child Health and Development, 成育生態学研究室, 室長 (20382856)
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| Keywords | microRNA / マウス / 性決定 / mRAP |
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| Research Abstract |
胎児期生殖腺支持細胞に於いて、miRNAの発現に雌雄差があるのかを検討した。昨年度Jackson Instituteから導入したマウス胎児期支持細胞特異的にEGFPを発現するマウスからGFPを指標に胎児期11.5日、12.5日の雌雄の胎児期支持細胞をセルソーターにより純化後、small RNAを用いてmRAP法とSolexa Genome Analyzerにて塩基配列を得たが、本年度はその塩基配列情報からmicroRNAのプロファイリングを試みた。塩基配列情報をmicroRNAのデータベースであるmiRBaseにBLASTにより相同性検索し、既知のmicroRNAに完全一致したものを抽出した。多量に存在するmicroRNAは塩基配列を決定する際により多数回配列が出現するものと考えられるため、配列の出現回数を発現頻度としている。雌雄での発現の差を検討するためには、内在性のコントロールとなるmicroRNAが知られていないため、塩基配列の際に同定されたすべてのmicroRNAの数の総和を分母にし、個々のmicroRNAの出現数を分子にし、発現頻度は割合で計算した。雌雄で発現に差のあるmicroRNAと、差の無いmicroRNAの存在が示唆される結果を得た。発現の高いmicroRNAについて雌雄差のあるものとないものをTaqMan法によりmicroRNAの発現量の雌雄差を再検討したが、その約半分のものでmRAP法とTaqMan法で一致する結果であったが、残りの半分は不一致であった。解析に用いた細胞数が数千個と少なかったため、安定した結果が得られなかった可能性が考えられる。今後解析のための細胞数を増やし、mRAP法により再検討する予定である。
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Research Products
(2 results)
