2009 Fiscal Year Annual Research Report
ナシにおける染色体識別と染色体上における有用遺伝子の可視化
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20580035
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
山本 雅史 Kagoshima University, 農学部, 准教授 (00305161)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 俊哉 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 果樹研究所, 研究チーム長 (60355360)
高田 教臣 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 果樹研究所, 研究員 (50355369)
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| Keywords | ナシ / 染色体 / FISH / in situハイブリダイゼーション / リボゾームRNA遺伝子 / rDNA / 18S-5.8S-25S / 細胞遺伝学 |
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| Research Abstract |
21年度は,ナシにおける染色体の蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)法の確立を図った。
ニホンナシ[Pyrus pyrifolia(Burm.F.)Nakai]'おさゴールド'およびセイヨウナシ(P.communis L.)'ラフランス'の自然交雑実生を材料とした。染色体標本作製の酵素解離の条件には,4%Cellulase Onozuka RS,1%Pectolyase Y-23で37℃,180分が適していた。プローブにはコムギ由来の18S-5.8S-25SリボゾームRNA遺伝子(rDNA)およびナシゲノムからPCR法によって増幅した18SrDNAを用いた。rDNAの位置は蛍光in situハイブリダイゼーションによって検出した.rDNAプローブはビオチン-16-dUTPで標識した.プローブはフルオレセイン(FITC)-アビジン結合体によって検出し,染色体はヨウ化プロピジウム(PI)で対比染色した.蛍光顕微鏡を用いてFITCをBフィルターで,PIをGフィルターで観察した。
おさゴールド'および'ラフランス'の18S-5.8S-25S rDNA遺伝子は,6本の染色体の端部に確認でき,この遺伝子の数および位置に種間差異は認められなかった。さらに'おさゴールド'の18S rDNA遺伝子は,18S-5.8S-25S rDNA遺伝子同様,6本の染色体の端部に確認できた.
引き続き,同時に2種類以上の遺伝子を検出するマルチカラーFISHの検討も行ったが,再現性の点で若干問題が残った。22年度はこの技術の確立を図るともに,有用遺伝子のナシ染色体上での位置を解明する。
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Research Products
(1 results)
