魚類の低分子結合性タンパク質ーリポカリンの大量発現と静菌活性に関する研究

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20580221
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 大嶋 雄治 Kyushu University, 大学院・農学研究院, 准教授 (70176874)
• Keywords: リポカリン / 静菌活性 / ヒラメ / 遺伝子組換え体

Research Abstract

平成21年度は以下の実験を行い成果を得た
1) カイコにおける新規ヒラメリポカリン(TBT-bp2)組換え体の作製と大量発現・精製
ヒスチジンタグ融合ヒラメリポカリン遺伝子をもつトランスファーベクターを作製し、このベクターによりバギュロウイルスのゲノムをもつ大腸菌を形質転換させることにより、Bacmid(バギュロウイルスプラスミド)にヒラメリポカリン遺伝子を導入した。作製したヒラメリポカリン-Bacmidをカイコガの細胞e21にトランスフェクションし、バギュロウイルスを増殖させ、ウイルスを回収してカイコガの腹腔内にインジェクションし、4～5日飼育後、血液を採取し、アフィニティークロマトグラフィーにより発現ヒラメリポカリンを大量精製に成功した。
2) 組換え体ヒラメリポカリンの細菌に対する静菌活性とシデロフォア結合性の検討
表記内容を行うため、鉄欠乏条件下で大腸菌の培養条件を検討した。しかし、鉄のコンタミが起こり、安定した培養系を作製することができなかった。魚病細菌Edmardsiella tardaシデロフォアに対する結合性の検討するため、E.tardaの培養を検討したが、鉄欠乏培地の作製が困難であった。
3) 組換え体ヒラメリポカリンrTBT-bp1の結合性とその機能の検証
得られたrTBT-bp1は分子量約35,000であり、TBT結合能を持つこと、およびリポカリンスーパーファミリーに特徴的な構造を有していることを示した。さらに、ヒブナ(Carassius auratus)鱗骨芽細胞における骨形成の指標であるアルカリホスファターゼ(ALP)活性を指標としてrTBT-bp1によるレスキュー試験を行った。その結果rTBT-bp1を共存させるとTBTによるALP活性阻害が抑制された。よってTBT-bp1はヒラメ体内でTBTと結合することによりその骨形成阻害を防いでいると考察している。

Research Products

• [Journal Article] Ovo nanoinjection of nonylphenol affects embryonic development of olvas-GFP/ST-II YI medaka, Oryzias latipes (2009)
  • Author(s): Hano T, Kinoshita M, Tanaka M, Y.W, Ozato O, Shimasaki Y, Oshima Y, Honjo T.
  • Journal Title: Chemosphere 77 Pages: 1594-1599
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pharmaceuticals and personal care products toxicity to medaka fish (2009)
  • Author(s): Nassef M, Matsumoto S, Seki M, Kang IJ, Moroishi J, Shimasaki Y, Oshima Y.
  • Journal Title: J.Fac.Agr.Kyushu Univ. 55 Pages: 407-412
• [Journal Article] (2009)
  • Author(s): Oshima Y, Nakayama K, Hano T, Kim SG, Shimasaki Y, Kang IJ, Honjo T
  • Journal Title: Toxic interactions between tributyltin and polychlorinated biphenyls in aquatic organisms(Springer)2009(Ed T.Arai et al(eds.), In "Environmental Impact of Antifouling Biocides) Pages: 195-205
• [Journal Article] In ovo nanoinjection of triclosan, diclofenac and carbamazepine affects embryonic development of medaka fish(Oryzias latipes)
  • Author(s): Nassef M, Kim SG, Seki M, Kang IJ, Hano T, Shimasaki Y, Oshima Y
  • Journal Title: Chemosphere (Accepted, 印刷中)
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Evaluation of mixture toxicity and its mechanism on medaka(Oryzias latipes)embryos nanoinjected with a binary mixture of tributyltin and polychlorinated biphenyls (2009)
  • Author(s): Yuji Oshima, Shuhei Matsumoto, Sang Gyoon Kim, Kei Nakayama, Ik Joon Kang, Yohei Shimasaki, Tsuneo Honjo
  • Organizer: 30th Meeting of Society of Society of Environmental Toxicology and Chemistry
  • Place of Presentation: New Orlens, USA
  • Year and Date: 20091220-20091224
• [Presentation] トリブチルスズ結合タンパク質とその遺伝子組換え体によるトリブチルスズーキンギョ鱗骨芽細胞 アルカリホスファターゼ活性阻害の回復 (2009)
  • Author(s): 大嶋雄治, 佐藤根妃奈, 大場由美, 李在萬, 日下部宜宏, 川畑俊一郎, 島崎洋平, 鈴木信雄, 笹山雄一
  • Organizer: 環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学
  • Year and Date: 20091207-20091208
• [Presentation] トリブチルスズ結合タンパク質(TBT-bp1)はTBTの骨芽細胞ALP活性阻害を回復させる (2009)
  • Author(s): 佐藤根妃奈, 李在萬, 日下部宜宏, 川畑俊一郎, 大場由美, 島崎洋平, 大嶋雄治, 鈴木信雄, 笹山雄一
  • Organizer: 第15回日本環境毒性学会・バイオアッセイ研究会合同研究発表会
  • Place of Presentation: 東京都
  • Year and Date: 20091003-20091004
• [Presentation] ヒラメトリブチルスズ結合タンパク質タイプ1はTBTと結合しその毒性を抑制する (2009)
  • Author(s): 大場由美, (九大院農)・鈴木信雄, (金沢大臨海)・島崎洋平・佐藤根妃奈, (九大院農)・笹山雄一, (金沢大臨海)・大嶋雄治, (九大院農)
  • Organizer: 日本水産学会秋季大会
  • Place of Presentation: 盛岡市
  • Year and Date: 20090930-20091001
• [Presentation] Tribu-tyltin-binding proteins from blood of Tiger puffer, Takifugu rubripes (2009)
  • Author(s): Yumi OBA, Akira YAMAUCHI, Yuji OSHIMA, Yohei SHIMASAKI, Hina SATONE, Takeshi KITANO, Miki NAKAO, Shun-ichiro KAWABATA4, Tsuneo HONJO
  • Organizer: 14th International Symposium on Toxicity Assessment
  • Place of Presentation: Mettz, France
  • Year and Date: 20090830-20090904
• [Presentation] Expression of tributyltin-binding protein type 1 in silkworms using by a baculovirus gene expression system (2009)
  • Author(s): Hina Satone, Jae Man Lee, Takahiro Kusakabe, Yumi Oba, Yohei Shimasaki, Yuji Oshima
  • Organizer: 14th International Symposium on Toxicity Assessment
  • Place of Presentation: Mettz, France
  • Year and Date: 20090830-20090904
• [Remarks]
  • URL: http://www.agr.kyushu-u.ac.jp/biosci-biotech/kankyo/index.html