2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20580313
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
久保田 浩司 Kitasato University, 獣医学部, 准教授 (80263094)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
垣内 一恵 北里大学, 獣医学部, 助教 (90509184)
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| Keywords | 精原幹細胞 / 精子形成 / 増殖因子 |
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| Research Abstract |
精原細胞の分化に必須であるKitチロシンキナーゼ遺伝子に突然変異があるW^v/W^v精子形成不全マウスより精原幹細胞の増殖因子であるグリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)依存性に増殖を続ける未分化精原細胞の長期培養系を確立した。その増殖速度は野生型精原幹細胞に比べ、かなり遅かったので、培養条件の最適化を行ったところ、低酸素環境が重要であることを明らかにした。低酸素環境で樹立されたGDNF依存性W^v/W^v未分化精原細胞は、野生型マウス由来の精原幹細胞と同様の細胞表面抗原表現型(CD90^+CD49f^+CD51^<low/->)を有していた。この分化不全W^v/W^v精原幹細胞への正常のKit遺伝子導入系の確立のため、まずプロモーターの検討を行ったところ、βアクチンプロモーターを用いた発現プラスミドが適していることが明らかとなった。この結果を踏まえ、Kit遺伝子発現プラスミドを構築した。野生型Kit遺伝子を発現するW^v/W^v精原幹細胞安定株を得るため、作成したプラスミドを用いて遺伝子導入実験を行い、安定株樹立のための条件を検討中である。また、野生型KITを発現するW^v/W^v精原幹細胞の幹細胞活性を細胞移植実験により検証するために、緑色蛍光色素(GFP)を導入したW^v/W^vマウスより同様のGDNF依存性の精原幹細胞株を樹立した。
精原幹細胞における効率的な発現プラスミド導入系の確立とGFP-W^v/W^v精原幹細胞株の樹立により、精原幹細胞からの分化過程を解明するための有用な実験系を構築することが可能となった。
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