2008 Fiscal Year Annual Research Report
特異的な糖結合活性を持つR型レクチンの糖鎖結合メカニズムの構造生物学的解析
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20580373
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| Research Institution | National Agricultural Research Organization |
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Principal Investigator |
逸見 光 National Agricultural Research Organization, 食品総合研究所食品分析研究領域, 主任研究員 (70353993)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久野 敦 独立行政法人産業技術総合研究所, 糖鎖医工学研究センター, 研究員 (50302287)
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| Keywords | 蛋白質 / 糖鎖 / NMR / レクチン / 糖認識ドメイン |
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| Research Abstract |
これまで申請者らにより、血球凝集能を持つミミズ由来R型レクチンC末端ドメイン(EW29Ch)中に存在する2つの糖結合部位の内の1つが他のR型レクチンの糖結合部位と結合モードが違うことを初めて見出した。従って、本研究では、KMRを用いて特異的な糖結合活性を持つEW29Chの糖鎖結合メカニズムを解析し、R型レクチンファミリーの幅広い機能を解明することを目的とする。本年度は、NMRによる遊離状態でのEW29Chの溶液中の立体構造解析を行った。今回、常法によるNOEからの距離情報及び二面角情報に加え、残余双極子相互作用定数を用いることにより、より精密に立体構造を決定した。その結果、すでに報告されている糖との複合体結晶構造と同様に、β-トレフォイル構造を形成しているが、一部ループ領域や糖結合に関係する残基において構造の違いがあることが明らかになった。これまでEW29Chの2つの糖結合部位において約100倍糖結合活性が異なるにもかかわらず、糖複合体結晶構造において2つの糖結合部位での糖との相互作用にほとんど違いが見出せなかったが、今回のNMR解析によりその構造機能相関がはじめて明らかになると期待される。現在、溶液中での複合体立体構造解析を行うため、EW29Chにラクトースを添加したサンプルを用いて複合体解析のためのKMR測定を行っている。また、リガントとの結合において重要であるタンパク質の分子内運動性についても、^<15>NでラベルしたEW29Chを用い、遊離状態及び糖結合状態のそれぞれについて、^<15>N-^1H NOE法により測定・解析を行った。その結果、糖結合により全体の運動性においてほとんど変化は見られなかったが、糖結合部位に関係する残基において変化が見られた。今後、さらに、他の分子内運動性解析用NMR測定法を用いて、糠結合による分子内運動性の変化についてより詳細に研究を進める予定である。
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Research Products
(2 results)
