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2009 Fiscal Year Annual Research Report

メタボリック症候群の改善を評価するコレステロール合成・吸収・代謝マーカーの分析

Research Project

Project/Area Number 20590044
Research InstitutionNigata University of Phermacy and Applied Life Sciences

Principal Investigator

田辺 顕子  Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences, 薬学部, 准教授 (70454212)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大和 進  新潟薬科大学, 薬学部, 教授 (60057370)
中川 沙織  新潟薬科大学, 薬学部, 助教 (30410228)
三井田 孝  順天堂大学, 医学部, 教授 (80260545)
Keywordsコレステロール / 植物ステロール / メタボリック症候群 / GC-MS / 分析化学
Research Abstract

本研究ではメタボリック症候群の改善を「生体内のコレステロール調節」という視点から評価することを目的とし、コレステロール前駆物質(スクアレン、ラソステロール)を合成マーカー、植物ステロール類(シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール)を吸収マーカー、ヒドロキシコレステロール類を代謝マーカーと位置づけ、これらを高感度かつ迅速に同時分析することによって治療薬やサプリメント成分の効果を評価する手法を確立する。
平成21年度は、20年度に開発した合成・吸収マーカーのGC-MS一斉定量法にスクアレンとスティグマステロールを加えるとともに、対象物質の誘導体化に対する挙動の違いに着目してIS(内標準物質)を採択し、定量精度の向上を図った。その結果、夾物質が多い血漿においては、TMS誘導体化を受けないスクアレンは5α-コレスタンをISとし、TMS誘導体化を受けるラソステロール及び植物ステロール類はこれらと同様の挙動を示すエピコプロスタノールをISに用いることで、より良好な定量精度が得られた。さらに、ヒト肝癌由来HepG2細胞を用いた細胞培養系における、細胞内のコレステロール合成マーカー(スクアレンおよびラソステロール)の定量法を確立し、スタチン系治療薬ならびにポリフェノール化合物のコレステロール生合成抑制作用の評価を試みた。HepG2細胞内のコレステロール合成マーカーは、ジルコニアビーズを用いた細胞膜破砕、ケン化、溶媒抽出の後、GC-MS定量を行うことで良好な直線性と回収率が得られた。10%LPDS(リポタンパク欠乏ウシ血清)含有DMEM培地を用いてHepG2細胞を培養すると、FBS培地に比べてスクアレンは約2倍、ラソステロールは約10倍の合成亢進が認められた。一方、アトルバスタチンまたはプラバスタチン存在下では、Hep細胞内のスクアレンは約28%~47%、ラソステロールは約70%減少し、治療薬の主作用であるコレステロール生合成の抑制が認められた。この系を用いてポリフェノールの一種である(-)エピカテキンを評価した結果、ラソステロールが約20%減少し、コレステロール生合成抑制効果が認められた。

  • Research Products

    (14 results)

All 2010 2009

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (9 results)

  • [Journal Article] Circadian change of serum concentration of small dense LDL-cholesterol in type 2 diabetic patients.2010

    • Author(s)
      Hirayama S, Soda S, Ito Y, Matsui H, Ueno T, Fukushima Y, Ohmura H, Hanyu O, Aizawa Y, Miida T
    • Journal Title

      Clinica Chimica Acta 411

      Pages: 253-257

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Impacts of angiopoietin-like proteins on lipoprotein metabolism and cardiovascualr events.2010

    • Author(s)
      Miida T, Hirayama S
    • Journal Title

      Current Opinion in Lipidology 21

      Pages: 70-75

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] コレステロール合成および吸収マーカー(lathosterol, sitosterol, campesterol)2010

    • Author(s)
      平山哲, 中川沙織, 大和進, 三井田孝
    • Journal Title

      The Lipid 21

      Pages: 20-26

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Seasonal variation in liver function tests : a time-series analysis of outpatient data.2009

    • Author(s)
      Miyake K, Miyake N, Kondo S, Tabe Y, Ohsaka A, Miida T
    • Journal Title

      Annals of clinical biochemistry 46

      Pages: 377-384

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Lipoprotein profiles in children with two common cholesteryl estertransfer protein gene mutations, D442G and I14A, during the first year of life.2009

    • Author(s)
      Nagasaka H, Yorifuji T, Momoi T, Yorifuji J, Hirano K, Ota A, Takatani T, Tsukahara H, Takayanagi M, Kobayashi K, Chiba H, Sato Y, Miida T
    • Journal Title

      Clinica Chimica Acta 406

      Pages: 52-56

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] GC-MSを用いるHepG2細胞内コレステロール生合成前駆体の定量法の確立とその応用2010

    • Author(s)
      上村友実子, 平澤美菜子, 小林美智子, 中川沙織, 大和進
    • Organizer
      日本薬学会第130年会
    • Place of Presentation
      岡山市
    • Year and Date
      2010-03-29
  • [Presentation] 24S-hydroxycholesterolなどのオキシステロール類における細胞毒性2010

    • Author(s)
      長谷川絵梨, 高橋香織, 中川沙織, 大和進
    • Organizer
      日本薬学会第130年会
    • Place of Presentation
      岡山市
    • Year and Date
      2010-03-28
  • [Presentation] サイクリングプローブ法を用いる薬物代謝酵素CYP2C19の非侵襲適な一塩基多型測定法2010

    • Author(s)
      桑原直子, 中川沙織, 下枝貞彦, 太田伸, 大和進
    • Organizer
      日本薬学会第130年会
    • Place of Presentation
      岡山市
    • Year and Date
      2010-03-28
  • [Presentation] カラムスイッチング法を用いる血漿中ミカファンギンの簡便な定量法の開発2009

    • Author(s)
      桑原直子, 中川沙織, 小林光, 下枝貞彦, 太田伸, 大和進
    • Organizer
      第53回日本薬学会関東支部大会
    • Place of Presentation
      埼玉県坂戸市
    • Year and Date
      2009-10-03
  • [Presentation] 5α-コレスタンおよびエピコプロスタノールを内標準物質に用いる血漿中コレステロール合成・吸収マーカーのGC-MS定量法2009

    • Author(s)
      田辺顕子, 上村友実子, 中川沙織, 大和進
    • Organizer
      日本分析化学会第58年会
    • Place of Presentation
      北海道札幌市
    • Year and Date
      2009-09-26
  • [Presentation] Sweeping-MEKC法によるステロイドホルモン一斉分析法の開発とウシ副腎皮質培養細胞系を用いる抗ストレス薬評価系への応用2009

    • Author(s)
      長谷川絵梨, 中川沙織, 田辺顕子, 立川英一, 大和進
    • Organizer
      日本分析化学会第58年会
    • Place of Presentation
      北海道札幌市
    • Year and Date
      2009-09-24
  • [Presentation] 糖尿病治療効果の指標としての血漿中ケトン体定量の有効性2009

    • Author(s)
      青柳克規, 中川沙織, 平山哲, 三井田孝, 大和進
    • Organizer
      第49回日本臨床化学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      長崎市
    • Year and Date
      2009-09-20
  • [Presentation] Simultaneous determination of ten steroids using sweeping-micellar electrokinetic capillary chromatography and its application to bovine adrenal cortex cells.2009

    • Author(s)
      Hasegawa E, Nakagawa S, Tanabe A, Tachikawa E, Yamato S
    • Organizer
      Euroanalysis 2009
    • Place of Presentation
      Innsbruck, Austria
    • Year and Date
      2009-09-07
  • [Presentation] Simultaneous determination of pregnenolone and 17-hydroxypregnenolone secreted by bovine adrenal cortex cells using immobilized cholesterol oxidase as a pre-column reactor.2009

    • Author(s)
      Nakagawa S, Tachikawa E, Yamato S
    • Organizer
      Euroanalysis 2009
    • Place of Presentation
      Innsbruck, Austria
    • Year and Date
      2009-09-07

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Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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