腫瘍融解性SINレプリコンの開発と腫瘍特異的SIN複製機構の解明

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20590302
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 白澤 浩 Chiba University, 大学院・医学研究院, 教授 (00216194)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 齋藤 謙悟 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教 (70451755)
• Keywords: 癌 / ウイルス / レプリコン / 腫瘍融解

Research Abstract

(腫瘍特異的融解性変異株の選別と解析)
nsP2にSINのアポトーシス誘導能があり、ウイルスレプリコンの複製能と細胞傷害性との間に相関のあることがGarmashova等によって最近明らかにされた(J.Virol.80, 5686-5696, 2007)。この知見に基づき、増殖能が高いクローンを選別する戦略により変異株の選別を平成20年度に行った。
その結果、HeLa細胞に対する細胞傷害性が高いクローンを選択し、ov-SINと命名した。ov-SINには、5'-UTRのnt35にG→Aの変異およびnsp2のアミノ酸438目にP→Lの変異が存在した。ov-SINは、Vero細胞に対しても細胞傷害性を示したが、静止期の正常ヒト繊維芽細胞に対して細胞傷害性を殆ど示さなかった。
(腫瘍特異的融解性レプリコンの作成と評価)
次に、ov-SINcDNAの5'UTR,nsP1,nsp2,nsP3,nsP4領域のcDNAをT7プロモーター下流に組み込み、in vitro合成したSIN RNAレプリコンによる細胞傷害性を検討した。
その結果、ov-SINレプリコンは、HeLa細胞に対してアポトーシスを誘導するが、Vero細胞に対するアポトーシス誘導能が極めて低いことが確認された。以上の結果から、nsp2のP→L(438)変異および5'-UTRの変異が、ov-SINの腫瘍特異性に関与している可能性が示唆された。
5'-UTRの変異が関与する可能性が示唆されたことから、レプリコンの複製効率の関与を検討するために、3'-UTRを組み込んだレプリコンを作成し、比較検討を行っている。

Research Products

• [Journal Article] Oncolytic activity of Sindbis virus in human oral squamous carinoma cells. (2009)
  • Author(s): Saito K, Uzawa K, Kasamatsu A, Shinozuka K, Sakuma K, Yamatoji M, Shiiba M, Shino Y, Shirasawa H, Tanzawa H
  • Journal Title: British Journal of Cancer 101 Pages: 684-890
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] TP53 codon 72 Polymorphism and cervical cancer : pooled analysis of individual data of 15 834 women from 49 studies. (2009)
  • Author(s): Stefanie J.Klug, Meike Ressing, Jochem Koenig, Martin C Abba, Theodoros Agorastos, Sylvia MF Brenna, Marco Ciotti, BR Das, Annarosa Del-Mistro, Aleksandra Dybikowska, Anna R Giuliano, Zivile Gudleviciene, Ulf Gyllensten, Andrea LF Haws, Aslaug Helland, Simon C Herrington, Alan Hildesheim, Olivier Humbey, Sun H Jee, Jae W Kim, Margaret M Madeleine, Joseph Menczer, Hext an YS Ngan, Akira Nishikawa, Yoshimitsu Niwa, Rosemary Pegoraro, MR Pillai, Gulielmina Ranzani, Giovanni Rezza, Adam N Rosenthal, Susanta Roychoudhury, Dhananjaya Saranath, Virginia M Schmitt, Sharmila Sengupta, Wannapa Settheetham-Ishida, Hiroshi Shirasawa, Peter JF Snijders, Mark H Stoler, Angel E Suarez-Rincon, Krisztina Szarka, Ruth Tachezy, Masatsugu Ueda, Ate GJ van der Zee, Magnus von Knebel Doeberitz, Ming-Tsang Wu, Tsuyoshi Yamashita, Ingeborg Zehbe, Maria Blettner
  • Journal Title: Lancet Oncology 10 Pages: 772-784
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Oncolytic virotherapy for oral squamous cell carcinoma using replication-competent viruses. (2009)
  • Author(s): Saito K, Shirasawa H, Isegawa N, Shiiba M, Uzawa K, Tanzawa H.
  • Journal Title: Oral Oncology 45 Pages: 1021-1027
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 特別講演:ウイルスはどこから来たのか? (2009)
  • Author(s): 白澤浩
  • Organizer: 第6回日本口腔ケア学会総会・学術大会
  • Place of Presentation: 栃木県総合文化センター
  • Year and Date: 2009-11-02
• [Presentation] シンドビスウイルスRNAレプリコンの癌細胞特異的CPE誘導能 (2009)
  • Author(s): 元清華、齋藤謙吾、八幡江里子、武藤利彦、山端渚、白澤浩
  • Organizer: 第57回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 都市センターホテル
  • Year and Date: 2009-10-28
• [Presentation] The effect of a cisplatin-encapsulating cancer-targeted liposome with viral proteins on cancer cells. (2009)
  • Author(s): 齋藤謙悟、八幡江里子、元清華、武藤利彦、山端渚、鵜沢一弘、丹沢秀樹、白澤浩
  • Organizer: 第68回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2009-10-03
• [Presentation] Cancer-specific cytotoxicity of Sindbis virus RNA replicon. (2009)
  • Author(s): 元清華、齋藤謙悟、八幡江里子、武藤利彦、山端渚、白澤浩
  • Organizer: 第68回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2009-10-03
• [Presentation] Oncolytic effects of structural proteins of Sindbis virus on human neuro blastoma cells. (2009)
  • Author(s): 八幡江里子、齋藤謙悟、元清華、武藤利彦、山端渚、菱木知郎、吉田英生、白澤浩
  • Organizer: 第68回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2009-10-03