結核菌低分子量分泌タンパクT細胞エピトープの同定と抗結核ワクチンへの応用

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20590438
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 永田 年 Hamamatsu University School of Medicine, 医学部, 教授 (90275024)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 辻村 邦夫 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (10227407) ; 小出 幸夫 浜松医科大学, 医学部, 理事 (30126809)
• Keywords: DNAワクチン / 結核 / 低分子量分泌タンパク / T細胞エピトープ

Research Abstract

結核菌由来低分子量分泌タンパクであるTB10.4(CFP7; Rv0288), TB18.5 (Rv0164), CFP10 (Rv3874), CFP11 (Rv2433c), CFP17(Rv1827), ESAT6 (Rv3875)について下記のように、本研究の基盤となるものの構築、作製をおこない、まず純系マウスを用いた解析を開始した。
1) 単一分子のDNAワクチン用プラスミドの構築 T細胞エピトープ同定のために、個々の低分子量分泌タンパク分子のDNAワクチンを構築した。結核菌H37Rvゲノム遺伝子からPCR法により、上記低分子量分泌タンパク各遺伝子を単離した。その塩基配列を確認後、DNAワクチンを構築した。
2) 抗原ペプチドライブラリーの作製 これらの低分子量分泌タンパク分子の全長を網羅する20merのペプチドからなるペプチドライブラリーを作製した。さらにコンピューターアルゴリズムを用いて、優勢(ドミナント)T細胞エピトープを予測した。T細胞エピトープの予測には、SYFPEITHI、BIMAS等を用いた。
3) DNAワクチンの純系マウスへの投与 上記プラスミドを金粒子にコートし、マウス皮膚に遺伝子銃(BIO-RAD社製)を使って接種した。
4) DNAワクチンの効果判定 マウスにDNAワクチン投与後、免疫終了1〜2週間後IFN-γELISA等のアッセイにより免疫効果の判定を行なっている。

Research Products

• [Journal Article] Intracytosolic Listeria monocytogenes induces cell death through caspase-1 activation in murine macrophages. (2008)
  • Author(s): Cervantes J, Nagata T, Uchijima M, Shibata K, Koide Y.
  • Journal Title: Cellular Microbiology 10 (1) Pages: 41-57
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of an HL A-A^*0201-restricted T-cell epitope on the MPT51 protein, a major secreted protein derived from Mycobacterium tuberculosis, by MPT51 overlapping peptide screening. (2008)
  • Author(s): Aoshi T, Nagata T, Suzuki M, Uchijima M, Hashimoto D, Rafiei A, Suda T, Chida K, Koide Y.
  • Journal Title: Infection and Immunity 76 (4) Pages: 1565-1571
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] In vivo hierarchy of individual T-cell epitope-specific helper T-cell subset against an intracellular bacterium. (2008)
  • Author(s): Nagata T, Aoshi T, Uchijima M, Koide Y.
  • Journal Title: Vaccine 26 (40) Pages: 5123-5127
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Chemokine receptor-mediated delivery of mycobacterial MPT51 protein efficiently induces antigen-specific T-cell responses. (2008)
  • Author(s): Uchijima M, Nagata T, Koide Y.
  • Journal Title: Vaccine 26 (40) Pages: 5165-5169
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Intratracheal administration of third-generation lentivirus vector encoding MPT51 from Mycobacterium tuberculosis induces specific CD8+T-cell responses in the lung. (2008)
  • Author(s): Hashimoto D, Nagata, T, Uchijima M, Seto s, Chida K, Miyoshi H, Nakamura H, Koide Y.
  • Journal Title: Vaccine 26 (40) Pages: 5095-5100
  • Peer Reviewed
• [Presentation] DNAワクチンを用いた結核菌低分子量分泌蛋白のマウスT細胞エピトープの同定 (2009)
  • Author(s): 永田年、鈴木大介、辻村邦夫、小出幸夫
  • Organizer: 第82回日本細菌学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 20090312-20090314
• [Presentation] DNAワクチンを用いたMycobacterial DNA binding protein 1(MDP1)のマウスT細胞エピトープの同定 (2009)
  • Author(s): 鈴木大介, 永田年, 辻村邦夫, 松本壮吉, 小出幸夫
  • Organizer: 第82回日本細菌学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 20090312-20090314
• [Presentation] Characterization of murine T-cell epitopes in mycobacterial DNA-binding protein 1 (2008)
  • Author(s): Suzuki D, Nagata T, Matsumoto S, Koide Y.
  • Organizer: DNA Vaccines 2008
  • Place of Presentation: Las Vegas, NV, USA
  • Year and Date: 20081209-20081211
• [Presentation] Characterization of human HLA-DR4-restricted CD4+ T-cell epitope on MPT5 1 protein, a major secreted protein derived from Mycobacterium tuberculosis. (2008)
  • Author(s): Wang L-X, Nagata T, Koide Y.
  • Organizer: DNA Vaccines 2008
  • Place of Presentation: Las Vegas, NV, USA
  • Year and Date: 20081209-20081211
• [Presentation] Characterization of murine T-cell epitopes in mycobacterial DNA-binding protein 1 (2008)
  • Author(s): Suzuki D, Nagata T, Matsumoto S, Koide Y.
  • Organizer: 第38回日本免疫学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 20081201-20081203