2009 Fiscal Year Annual Research Report
ウェルシュ菌ε毒素プロモーター下流のbent DNAの解析と応用
| Project/Area Number |
20590448
|
|---|
| Research Institution | Kagawa University |
|---|
Principal Investigator |
宮田 茂 Kagawa University, 医学部, 講師 (90314913)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
成谷 宏文 香川大学, 医学部, 助教 (30452668)
|
|---|
| Keywords | ウェルシュ菌 / イプシロン毒素 / bent DNA / プロモーター / フェレドキシン / 糖鎖分解酵素 / クロストリパイン / AT-rich遺伝子 |
|---|
| Research Abstract |
連続したアデニン塩基が周期的に存在(phased A-tracts)すると、折れ曲がりDNA(bent DNA)を形成する。昨年度は、3種類のbending promoter(α毒素、フェレドキシン、ε毒素)の転写における温度依存性調べ、α毒素は25℃で、ε毒素は37℃で、フェレドキシンは温度に関係なく高い転写活性を示すことを明らかにした。今年度は、広い温度範囲にわたり高い転写活性をもつフェレドキシン・プロモーターを利用して、大腸菌では発現・精製が困難なclostripain-like protease (Clp)及び糖鎖分解酵素群(NagH、NagJ、NanJ、BgaA)のウェルシュ菌による発現系を構築した。さらに、これらの酵素を精製し、その生化学的性質を調べたところ、ClpはそのオルソログであるC. histolyticumのクロストリパインと比較してアルギニン特異性が低い酵素であった。NagHは、0-GlcNAc化タンパク質からGlcNAcを遊離させる活性を持つが、その他の基質に対しては酵素活性を示さなかった。NanJ、BgaA、NagJは協同的に糖鎖を分解することが示唆された。
また、ε毒素プロモーターの転写解析のため、新規プラスミド及びレポーター・システムを構築した。新規レポーター・システムでは、細胞内シアリダーゼであるNanHをレポーターとし、今までのクロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼをレポーターとする系に比べて10倍以上のダイナミックレンジを有していた。現在、ε毒素プロモーターについてさらに詳細に調べている。
|
Research Products
(2 results)
